人PINK1-shRNA载体的构建及对神经母细胞瘤细胞线粒体的影响

发布时间：2021-01-05 16:33

　　目的:构建筛选人源靶向特异PINK1-shRNA敲减质粒,转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞并验证该质粒转染后对PINK1基因的敲减效率,观察对细胞线粒体形态的影响。方法:构建两对人源PINK1-shRNA序列（编号分别为PINK1-shRNA-39和PINK1-shRNA-42）,将这2对干扰序列连接在载体上形成重组载体,经测序验证后,将空载体和两对敲减质粒分别转染SH-SY5Y细胞,获得基因敲减的细胞模型,用CCK-8法检测细胞的存活率,用荧光定量PCR方法确定PINK1基因的敲减效率,用蛋白质免疫印迹法验证细胞内PINK1的表达水平是否发生改变,用激光共聚焦显微镜观察线粒体的形态是否发生了改变。结果:我们提取的质粒,经测序结果显示,质粒载体构建成功;转染细胞后,CCK-8法检测细胞存活率发生了降低,与正常组比较,PINK1-shRNA-39和PINK1-shRNA-42敲减质粒组,细胞的存活率分别降低了13.7%（P<0.05）和14.1%（P<0.05）;荧光定量PCR结果显示,与正常组相比,PINK1-shRNA-39组和PINK1-shRNA-42组敲减质粒转染... 

【文章来源】：现代生物医学进展. 2020,20(22)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

PINK1-sh RNA测序结果

细胞正常培养状态下，细胞形态结构正常、完整；质粒转染细胞后，通过倒置荧光显微镜观察SH-SY5Y细胞内绿色荧光蛋白（GFP）的表达，结果显示，正常组细胞内未观测荧光蛋白的表达，空载体组和两个基因敲减组细胞内有较多的绿色荧光蛋白表达，见图2。2.3 细胞存活率的检测结果

CCK-8法检测细胞存活率结果显示，与正常组比较，PINK1-sh RNA-39和PINK1-sh RNA-42敲减质粒转染细胞后，细胞内的存活率分别降低了13.7%(P<0.05）和14.1%(P<0.05）；空载体组与正常组比较，表达水平变化没有明显的差异。结果见表2和图3。2.4 转染SH-SY5Y细胞后PINK1基因的m RNA表达情况

【参考文献】：
期刊论文
[1]温胆益脑汤联合多巴丝肼对老年帕金森病人血清YKL-40、IL-1β、BDNF的影响[J]. 戴军,罗亚明,曹雄彬,南毛球,周航,刘雅芳.  中西医结合心脑血管病杂志. 2018(09)
[2]三七总皂苷微乳对帕金森模型小鼠行为学及纹状体多巴胺含量的影响[J]. 任静,吴玉梅,马丽,常梦春,刘勃缨,张丽娜,刘志东.  天津中医药大学学报. 2018(03)
[3]针刺舞蹈震颤控制区对帕金森病小鼠脑内黑质多巴胺神经元及BDNF表达的影响[J]. 冯婧,孙红梅,王媛媛,许红,吴海霞,和欣,高誉珊,张淑静,龚小钢.  北京中医药大学学报. 2014(01)



本文编号：2958953