肢体远程缺血后处理对脑缺血再灌注后大鼠HIF-1α及HSP70表达的影响

发布时间：2017-04-11 05:13

  本文关键词：肢体远程缺血后处理对脑缺血再灌注后大鼠HIF-1α及HSP70表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的采用线栓法建立局灶性脑缺血(MCAO)模型,观察再灌注不同时间点大鼠神经功能损伤情况,以及大鼠脑梗死区周围低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)的表达变化,初步探讨LRIP对脑梗死周边区神经元和星形胶质细胞保护作用的可能机制。方法健康成年雄性SD大鼠,随机分为3组分别为假手术组(Sham)、局灶性脑缺血再灌注损伤模型组(I/R)和肢体远程缺血后处理组(LRIP)。采用鱼线线栓法建立局灶性大脑中动脉脑缺血(1h)再灌注损伤模型;橡皮筋结扎大鼠双下肢,结扎10min,放松10min,重复3次建立肢体远程缺血后处理模型;于再灌注1d、3d分别断头取脑,Zea longa评分作为判断模型成功的标准,Garcia JH神经行为学评分方法用于检测大鼠神经行为学损伤程度,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测脑梗死体积,EB用于检测血脑屏障通透性大小,HE、Nissl染色观察大鼠脑组织形态学变化。Q-PCR用于检测HIF-1αm RNA的表达变化,Western blotting检测HSP70的蛋白表达变化,免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测HIF-1α和HSP70阳性细胞的表达变化以及细胞定位。结果1.Garcia JH结果显示,与假手术组比,I/R和LRIP组大鼠神经行为学评分明显降低(P0.05),而LRIP处理后神经行为学评分明显增加(P0.05)。2.TTC染色发现I/R和LRIP组大鼠大脑皮质及纹状体出现明显梗死;与I/R组比,LRIP大鼠脑梗死体积明显减少(P0.05)。3.EB检测结果显示I/R和LRIP大鼠皮质和纹状体出现明显EB渗漏(P0.01),应用LRIP处理后EB渗漏明显降低(P0.05)。4.HE染色结果显示脑缺血再灌注损伤后神经元出现萎缩、细胞核变小、染色加深。5.Nissl染色结果显示脑缺血再灌注损伤后神经元尼氏体数量减少甚至消失。6.Q-PCR和免疫组织化学结果显示,与Sham组比,HIF-1αm RNA和阳性细胞数表达显著增加,应用LRIP后HIF-1αm RNA表达明显减少其中1d(P0.05),3d无统计学意义,阳性细胞计数明显降低(P0.01),主要表达在神经元和星形胶质细胞。7.Western blotting和免疫组织化学结果显示脑缺血再灌注损伤后HSP70蛋白和阳性细胞表达明显增加,应用LRIP处理后HSP70蛋白表达明显增加,其中1d组无统计学意义(P0.05),3d组有显著统计学意义(P0.01),HSP70阳性表达主要在梗死区周围神经元、部分血管内皮细胞和星形胶质细胞突起。结论1.大鼠双下肢橡皮筋结扎10min,放松10min,重复3次对脑缺血再灌注损伤具有明显保护作用。2.LRIP发挥脑保护作用可能与其下调皮质梗死区周围神经元和星形胶质细胞HIF-1α表达,上调神经元、血管内皮细胞和星形胶质细胞HSP70表达有关。
【关键词】：脑缺血再灌注损伤 肢体远程缺血后处理 大鼠 缺氧诱导因子-1α 热休克蛋白70
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 1 材料与仪器13-22
• 1.1 主要实验仪器13-14
• 1.2 主要实验试剂14-16
• 1.3 主要试剂的配置16-22
• 2 实验方法22-37
• 2.1 实验动物与分组22
• 2.2 局灶性脑缺血（MCAO）模型制备22-23
• 2.3 假手术组（sham）模型制备23
• 2.4 肢体缺血后处理（LRIP）模型制备23
• 2.5 神经行为学评分23-24
• 2.6 脑梗死体积测定24-25
• 2.7 血脑屏障（BBB）通透性检测25-26
• 2.8 Q-PCR26-28
• 2.9 Western blotting分析28-31
• 2.10 石蜡切片的制作31-33
• 2.11 冰冻切片33
• 2.12 石蜡切片HE染色33-34
• 2.13 石蜡切片免疫组织化学染色34-35
• 2.14 冰冻切片免疫荧光染色35
• 2.15 Nissl染色35-36
• 2.16 图像分析及统计方法36-37
• 3 结果37-51
• 3.1 LRIP改善神经行为学损伤37-38
• 3.2 LRIP减少脑梗死体积38-39
• 3.3 LRIP降低血脑屏障通透性39-41
• 3.4 HE41
• 3.5 Nissl染色41-42
• 3.6 Q-PCR42-43
• 3.7 Western blotting分析43-44
• 3.8 免疫组织化学44-51
• 4 讨论51-57
• 4.1 LRIP降低CIR51-52
• 4.2 LRIP调控HIF-1α 表达52-53
• 4.3 LRIP调控HSP70 表达53-54
• 4.4 HIF-1α 与HSP7054-57
• 5 结论57-58
• 参考文献58-63
• 综述63-74
• 参考文献70-74
• 附录74-76
• 攻读学位期间研究成果76-77
• 致谢77-78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 陈萌;李涵;赵淑敏;孔祥玉;;预处理与脑缺血耐受的研究进展[J];承德医学院学报;2008年01期

2 郑关毅;陈晓春;刘昌云;方芳;张静;黄天文;曾育琦;;一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡[J];解剖学报;2006年06期

3 姜维喜;刘庆;袁贤瑞;;预适应与后适应联合干预对脑缺血/再灌注损伤的保护作用[J];中南大学学报(医学版);2014年01期

4 白v，

本文编号：298389