FRAT1通过Wnt/β-catenin通路增强胶质瘤干细胞的增殖能力研究

发布时间：2021-02-04 17:12

　　目的:脑胶质瘤（Glioma）是成人最常见的原发性恶性中枢神经系统肿瘤。尽管目前常规综合治疗（手术、放疗、化疗）的方法在不断改善,但疗效仍未得到显著提高。目前研究证实,在脑胶质瘤中存在一些胶质瘤干细胞。它是一种具有无限增殖、自我更新、多向分化等干细胞特性的肿瘤原始细胞,它可能是诱导胶质瘤发生、复发,导致预后较差的原因,因此靶向治疗胶质瘤干细胞将成为研究脑胶质瘤的一大热点。在脑胶质瘤中,作为一条高度保守的信号通路,Wnt/β-catenin信号转导通路是通过调控胚胎生长、发育、能量代谢和干细胞维持等多种生物学过程,在神经系统的发生和形态发育中起重要作用。近年有研究表明FRAT1作为Wnt/β-catenin信号转导通路的重要成员,在多种恶性肿瘤包括神经胶质瘤中过度表达,并且在神经干细胞增殖过程中有重要的调控作用。但目前国内外尚未报道关于该基因与胶质瘤干细胞的相关性研究。本论文旨在研究FRAT1对胶质瘤干细胞体外、体内增殖能力的影响以及探讨其作用机制。方法:通过慢病毒转染技术敲低FRAT1的表达,构建出低表达FRAT1的胶质瘤干细胞模型。采用细胞增殖CCK-8实验,研究FRAT1低表达对胶... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

免疫荧光染色观察CD133、Nestin在

图 2 免疫荧光双染法观察 FRAT1 与 CD133 在胶质瘤干细胞中的共表达（×400）。光显微镜下观察 CD133 和 FRAT1 在胶质瘤干细胞 U251 的胞质胞浆中染色阳性，在胶质瘤干细胞中 FRAT1 与 CD133 有共定位现象。2.3 FRAT1 的低表达抑制胶质瘤干细胞的体外增殖能力CCK-8 检测结果显示：随着培养胶质瘤干细胞时间的延长，全自动酶标仪上A450 OD 值不断升高，进而说明胶质瘤干细胞的数目随着培养时间的延长不断增加。统计分析显示，A 组的 OD 值明显低于 B 组（P=0.036）和 C 组（P=0.030），而 B 组和 C 组 OD 值的差异无意义（P=0.934）。并根据 1，2，3，4，5，6 天酶标仪的 A450 OD 值绘制 A、B 和 C 三组的生长情况（如表 1，图 3 所示）。A450 OD值差异最大出现在第 6 天，A450 OD 值在 A、B、C 三组分别是：1.4029±0.0861，2.4371±0.0456，2.645±0.0563。CCK-8 体外增殖实验证实低表达的 FRAT1 能够显著

图 3 CCK-8 检测 A，B，C 组 1-6 天的生长情况图 3 CCK8 实验证明胶质瘤干细胞中低表达 FRAT1 对其体外增殖能力的影响。连续观察 1-6 天，可见胶质瘤干细胞 A 组的 A450 OD 值显著低于 B、C 组，P<（A 组为敲低 FRAT1 组，B 组为无关序列组，C 组为正常细胞组）。2.4 FRAT1 的低表达抑制胶质瘤干细胞的体内增殖能力（1）荷瘤鼠模型建立后，用小动物磁共振分别观察三组荷瘤鼠于 0 天，7 天14 天，21 天时颅内肿瘤生长情况，并测算出每次颅内肿瘤体积大小。实验发现培养时间的延长，三组荷瘤鼠颅内肿瘤体积也是不断增大。肿瘤差异最大出现在天时（如表 2，图 4，图 5 所示），A、B、C 三组肿瘤体积分别是：1.3877±0.05.7853±0.7501，6.2033±0.897。A 组的肿瘤体积明显低于 B 组（P=0.045）和 C （P=0.034），，而 B 组和 C 组肿瘤体积差异无意义（P=0.841）。表 2 MRI 检测 A，B，C 组在 7，14，21 天的颅内肿瘤体积大小（mm2）

【参考文献】：
期刊论文
[1]Wnt/β-catenin信号转导通路与脑胶质瘤[J]. 陈梦娜,刘婷,郭庚.  国际肿瘤学杂志. 2013 (09)



本文编号：3018656