FIP200在ATRA诱导NSCs自噬、分化和凋亡过程中表达的研究

发布时间：2017-04-13 12:19

  本文关键词：FIP200在ATRA诱导NSCs自噬、分化和凋亡过程中表达的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本课题通过采用从小到大不同浓度ATRA诱导培养小鼠NCSs,研究在此条件下细胞发生自噬、分化和凋亡过程当中FIP200蛋白和它的相互作用蛋白的表达水平改变,来初步证实维甲酸是通过影响FIP200的蛋白表达水平来对神经干细胞不同生物过程进行调控的,同时研究自噬分别与分化和凋亡的关系,从而为进一步揭示维甲酸对神经系统疾病的影响提供依据。方法:从孕14.5天C57BL/6J小鼠胎鼠中分离得到大脑组织进行提取细胞为NSCs,通过光学显微镜下观察及分化后的免疫荧光染色鉴定。第三代神经干细胞分别加入不同浓度大小的ATRA(0、0.1、0.5、1、5、10、15、20μM)诱导培养24h,吖啶橙(AO染色)计数自噬发生率,为检测LC3-Ⅱ,用RT-PCR法和蛋白质印迹法检测FIP200和p53基因蛋白的表达水平,研究维甲酸对神经干细胞FIP200和自噬水平变化的作用。加入较低浓度的ATRA(0、0.1、0.5、1、5μM)诱导7天,运用细胞免疫荧光法及蛋白质印迹法检测各组分化率,加入自噬抑制剂LY294002后,检测1μM ATRA诱导NSCs的分化率变化,研究ATRA诱导NSCs分化与自噬的关系;以及蛋白质印迹法检测RB1表达水平。加入较高浓度的ATRA(5、10、15、20、40μM)诱导培养24h,运用流式细胞术检测神经干细胞的凋亡率,再次运用RT-PCR法和蛋白质印迹法技术检测此5组FIP200蛋白的表达水平,加入自噬抑制剂后比较凋亡率的变化,研究ATRA诱导NSCs凋亡与自噬的关系。结果:(1)胎鼠大脑组织中可以提取出NSCs,镜下观察呈圆球状生长,细胞分化荧光鉴定结果得以再次证实。(2)不同浓度维甲酸诱导神经干细胞,FIP200蛋白和自噬水平是先增高后下降的趋势,P53则相反。(3)低浓度的维甲酸诱导神经干细胞分化与FIP200表达成正相关,抑制自噬不能抑制分化,分化与RB1有关。(4)高浓度的维甲酸诱导神经干细胞凋亡与FIP200表达成负相关,抑制自噬可以在一定程度上增加凋亡。结论:FIP200在维甲酸诱导神经干细胞过程中起到的是促分化、抗凋亡的作用。
【关键词】：维甲酸 神经干细胞 FIP200
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 常用缩写词中英文对照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 神经干细胞体外培养、分化及鉴定14-22
• 1 实验材料与方法14-18
• 1.1 实验材料14-15
• 1.2 动物饲养15
• 1.3 神经干细胞的原代培养及传代15-16
• 1.4 神经干细胞的Nestin鉴定16
• 1.5 神经干细胞的多向分化鉴定16-18
• 2 结果18-20
• 2.1 神经干细胞培养18
• 2.2 神经干细胞及分化鉴定结果18-20
• 3 讨论20-22
• 第二部分 FIP200 在ATRA诱导NSCs自噬过程中表达的研究22-38
• 1 实验材料与方法22-31
• 1.1 实验材料22-23
• 1.2 AO染色检测自噬酸性囊泡23-24
• 1.3 RT-PCR检测神经干细胞LC3-Ⅱ、FIP200 的mRNA表达水平24-27
• 1.4 蛋白质印迹法检测神经干细胞LC3-Ⅱ、FIP200、P53 的蛋白表达水平27-30
• 1.5 统计方法30-31
• 2 结果31-35
• 2.1 FIP200 在维甲酸诱导神经干细胞表达的研究31-32
• 2.2 不同浓度维甲酸诱导神经干细胞及发生自噬32-35
• 3 讨论35-38
• 第三部分 低浓度ATRA诱导NSCs分化与FIP200 表达呈正相关，抑制自噬不能抑制分化，分化与RB1 相关38-47
• 1 实验材料与方法38-42
• 1.1 实验材料38-39
• 1.2 细胞免疫荧光检测神经干细胞向神经元的分化率39-40
• 1.3 蛋白质印迹法检测神经干细胞向星形胶质细胞的分化率40
• 1.4 加入自噬抑制剂检测神经干细胞分化率40
• 1.5 蛋白质印迹法检测RB1 的表达40
• 1.6 统计方法40-42
• 2 结果42-45
• 2.1 低浓度维甲酸能诱导神经干细胞分化42-43
• 2.2 加入自噬抑制剂LY294002 分化率无明显变化43-44
• 2.3 FIP200 的相互作用蛋白RB1 的表达44-45
• 3 讨论45-47
• 第四部分 高浓度ATRA诱导NSCs凋亡与FIP200 表达呈负相关，，抑制自噬可以增加亡47-53
• 1 实验材料与方法47-49
• 1.1 实验材料47
• 1.2 流式细胞术检测神经干细胞凋亡率47-48
• 1.3 加入自噬抑制剂检测凋亡率的变化48
• 1.4 统计方法48-49
• 2 结果49-51
• 2.1 高浓度维甲酸能诱导神经干细胞凋亡49-50
• 2.2 加入自噬抑制剂LY294002 可以明显增加凋亡率50-51
• 3 讨论51-53
• 结论53-54
• 参考文献54-59
• 综述59-70
• 参考文献65-70
• 致谢70-71
• 在学期间研究成果71-72
• 个人简介72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 许丽,张珍祥,徐永健;香烟烟雾提取物对气道上皮细胞增殖和FIP200表达的影响[J];第四军医大学学报;2005年19期

  本文关键词：FIP200在ATRA诱导NSCs自噬、分化和凋亡过程中表达的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：303613