miRNA-338-5p抑制胶质瘤增殖、侵袭的作用及靶向CTBP2蛋白的核素显像研究

发布时间：2021-02-18 02:19

　　目的:1、评价mi R-338-5p在胶质瘤组织中的表达水平及其与胶质瘤患者临床病理特征之间的关系;2、探索mi R-338-5p在胶质瘤细胞中的作用,寻找其作用靶基因,为胶质瘤诊断和治疗研究提供新靶点;3、引入噬菌体展示肽库技术,筛选和鉴定具有靶向能力的高亲和特异性多肽;4、核素标记、合成探针,与荷瘤鼠中评价中选小肽的肿瘤靶向性。材料与方法:运用q RT-PCR的方法检测了胶质瘤及其正常脑组织标本中mi R-338-5p的表达;通过脂质体瞬时转染法,将mi R-338-5p mimics导入胶质瘤细胞T89G和U87中,提高内源性mi R-338-5p的表达后,使用CCK-8细胞增殖实验检测mi R-338-5p对胶质瘤细胞增殖能力的影响;利用生物信息学工具,预测了与mi R-338-5p作用的位点在CTBP2的3’UTR区域,利用荧光素酶报告基因实验证实该结合位点。通过CCK8实验和Transwell细胞侵袭实验探索CTBP2是否是mi R-338-5p的直接作用靶基因。通过对比CTBP2特定序列寻找CTBP2特异性亲和配体。获得特定序列后,将其列为靶分子特异性结合的肽段,用于筛选... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

miRNA分子的生物合成示意图

V 级别胶质瘤组织标本中 miRNA-338-5p 相对表达量为0.31±0.14。正常组织 miRNA-338-5p 表达量显著高于胶质瘤组织（p=0.01）。（图2.1）我们将相对表达量大于等于 0.55 定义为高表达，将相对表达量低于 0.55 定义为低表达。并与胶质瘤的各种临床病理特征进行了相关性分析。我们发现，miRNA-338-5p 的相对表达量与胶质瘤的 WHO 分级相关（p=0.006），与 Karnofsky表现值相关（p=0.007）。（表 2.1）图 2.1 正常组织与胶质瘤组织 miRNA-338-5p 相对表达量的比较

3.3 实验结果3.3.1 m i R-338-5p 对胶质瘤细胞增殖能力的影响生长情况胶质瘤系T98G和U87中于6孔板中瞬时转染miR-338-5p mimics和阴性对照24小时之后进行胰酶工作液消化处理（传代），重新铺种于96孔细胞培养板板中（1500个细胞/孔），置于细胞培养箱中，并分别在培养的第0小时、24小时、48小时、72小时和96小时加入CCK-8试剂（每孔10 μL），将培养细胞在细胞培养箱中充分孵育3小时后，采用分光光度计测定每个细胞培养孔的OD值。细胞培养的对照研究结果表明，胶质瘤细胞转染mimics上调miR-338-5p的表达水平后，与对照组相比，肿瘤细胞的生长趋势明显受到抑制（P<0.05，如图3所示）。细胞克隆形成实验示miR-338转染入U87和T98G后的细胞增殖明显减低（P<0.05，图3.2 A-B）。


本文编号：3038889