亮氨酸干预mTOR表达对局灶性脑缺血自噬的影响

发布时间：2017-04-13 16:13

  本文关键词：亮氨酸干预mTOR表达对局灶性脑缺血自噬的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨亮氨酸干预mTOR表达对局灶性脑缺血自噬及脑缺血损伤的影响。方法:选取健康成年雄性SD大鼠随机分为生理盐水组(对照组)、葡萄糖组和亮氨酸组,各组均采用线栓法制作大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,并依据分组在建模后立即颈静脉灌注0.9%生理盐水、5%葡萄糖、1.5%亮氨酸。在缺血6h、12h、24h时麻醉处死大鼠,取缺血侧皮层脑组织,采用Western blot法和免疫组化法检测mTOR、LC3-Ⅱ的表达情况,以行为学症状、脑组织干湿比重及病理改变评价缺血性脑损伤的病变程度。结果:Western blot结果显示,在相同缺血时间段,亮氨酸组与生理盐水、葡萄糖组相比较,缺血侧大脑皮层内mTOR表达增高,LC3-Ⅱ表达减少,差异有统计学意义(p0.05);免疫组化结果显示,只有在缺血12h时,亮氨酸组与生理盐水、葡萄糖组比较才存在上述差异,而在24h时mTOR表达无统计学差异(p0.05),在6h时LC3-Ⅱ表达无统计学差异(p0.05);将具有神经功能障碍且评分为1-3分的实验大鼠行脑组织病理切片检查,可见所有大鼠均有局灶性脑缺血相关病理改变,且随缺血时间的延长,坏死、消失的神经细胞增多;在相同缺血时间段,生理盐水、葡萄糖、亮氨酸各组之间行为学评分、脑组织干湿比重无统计学差异(p0.05),但各组在不同的缺血时间段脑组织干湿比重有统计学差异(p0.05)。结论:1、神经功能障碍评分可一定程度上反映模型动物局灶性脑缺血的形成;2、在脑缺血发生后6-24h内,亮氨酸可促进mTOR的表达,在12h时达高峰,此时可一定程度上减弱自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达;3、在脑缺血发生6-24h内,亮氨酸及其刺激mTOR的表达对脑缺血病变相关指标如神经功能评分、脑水肿程度及病理改变无明显改善作用,但随着缺血时间的延长,脑损害逐步加重。
【关键词】：脑缺血 亮氨酸 mTOR 自噬
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文缩略词表8-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料与方法14-22
• 2.1 实验动物14
• 2.2 主要试剂14-15
• 2.3 主要仪器15
• 2.4 实验分组15-16
• 2.5 制作大鼠MCAO模型及颈静脉灌注16-17
• 2.6 Zea Longa评分及建立MCAO模型后的入选标准17
• 2.7 指标的测定及方法17-21
• 2.7.1 脑水肿程度测定17
• 2.7.2 HE染色17-19
• 2.7.3 免疫组化19-20
• 2.7.4 Westen blot法20-21
• 2.8 统计学分析21-22
• 第3章 实验结果22-33
• 3.1 神经功能障碍评分22-23
• 3.2 脑水肿程度测定23-24
• 3.3 HE染色24-25
• 3.4 免疫组织化学染色分析25-29
• 3.4.1 mTOR结果分析25-27
• 3.4.2 LC3-Ⅱ结果分析27-29
• 3.5 Western blot结果分析29-33
• 第4章 讨论33-38
• 4.1 大鼠MCAO模型的建立与评价33-34
• 4.2 亮氨酸激活mTOR34-35
• 4.3 参与调节mTOR的主要信号通路及亮氨酸、mTOR抑制自噬的机制探讨35-36
• 4.4 自噬对脑缺血作用的探讨36-38
• 第5章 结论38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-44
• 综述 IL-33/ST2 信号通路在缺血性脑损害中的保护作用44-50
• 参考文献49-50

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本文编号：303972