Maspin在胶质瘤中表达沉默的机制及功能研究

发布时间：2017-04-13 20:00

  本文关键词：Maspin在胶质瘤中表达沉默的机制及功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分Maspin在胶质瘤中表达沉默的机制研究目的:Maspin是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,在肿瘤中调控细胞侵袭、转移及肿瘤血管生成等,与肿瘤的发生、发展关系密切,但其在胶质瘤中沉默的机制研究尚少。本实验主要探索maspin在胶质瘤中表达沉默的可能机制。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹(Western Blot)两种方法检测胶质瘤细胞株U87、U251和U343细胞中maspin基因的m RNA和蛋白表达情况;EMBOSS Cpgplot用于分析maspin基因启动子区是否存在Cp G岛;使用去甲基化药物5-Aza-DC处理U87和U251细胞后,运用RT-PCR检测药物干预后maspin基因的m RNA表达情况;甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)检测U87和U251细胞中maspin基因启动子区甲基化状态;亚硫酸盐测序检测U87和U251细胞,确定maspin基因启动子区甲基化Cp G位点。结果:在胶质瘤细胞株U87、U251和U343细胞中maspin基因表达沉默;EMBOSS Cpgplot显示maspin基因启动子区存在1个Cp G岛;使用5-Aza-DC干预后maspin基因恢复转录;进一步使用MSP检测发现U87和U251细胞启动子区处于甲基化状态;亚硫酸盐测序结果显示测序PCR产物中预期Cp G甲基化位点均发生甲基化。结论:在胶质瘤中,maspin的表达抑制与其启动子Cp G岛甲基化相关;5-Aza-DC能恢复maspin在胶质瘤细系U87和U251细胞中的转录。第二部分Maspin对胶质瘤细胞株U87作用的体外实验目的:上一部分中已经证明maspin在胶质瘤中表达沉默与其启动子甲基化相关。同时maspin在大多数肿瘤中具有抑制肿瘤细胞侵袭与转移、凋亡以及肿瘤血管的形成等功能,然而maspin在胶质瘤中的功能未见报道。在本部分,通过在人胶质瘤细胞株U87细胞中构建稳定过表达maspin基因的细胞株,在体外实验中观察maspin对U87细胞的生物学影响。方法:使用携带空病毒载体和携带maspin基因的慢病毒载体转染胶质瘤细胞株U87,筛选获得稳定表达靶基因的胶质瘤细胞U87-NC和U87-maspin细胞,应用RT-PCR和Western Blot检测maspin的转染效果;利用Transwell小室及预铺Matrigel基质胶的Transwell小室检测maspin对U87细胞迁移、侵袭能力的影响;运用流式细胞仪技术分析maspin对U87细胞周期的影响;CCK-8方法检测maspin对U87细胞增殖的影响。结果:成功构建过表达maspin基因细胞株U87-maspin,RT-PCR和Western Blot均显示转染过表达maspin慢病毒载体后有效的改变了U87细胞内maspin的转录、表达水平;Maspin过表达后,U87细胞增殖能力减弱,细胞周期停滞于S期,但U87细胞的迁移和侵袭无明显影响。结论:Maspin能显著抑制U87细胞增殖,使U87细胞停滞在S期,表明maspin在胶质瘤中可能具有抑癌基因特性。
【关键词】：Maspin CpG岛 启动子甲基化 Maspin 增殖 细胞周期
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-14
• 参考文献11-14
• 第一部分 MASPIN在胶质瘤中表达沉默的机制研究14-32
• 引言14
• 材料和方法14-25
• 结果25-28
• 讨论28-30
• 参考文献30-32
• 第二部分 MASPIN对胶质瘤细胞株U87 作用体外实验32-45
• 引言32
• 材料和方法32-37
• 结果37-40
• 讨论40-42
• 参考文献42-45
• 结论45-46
• 综述 MASPIN基因在肿瘤中的研究进展46-56
• 1．MASPIN基因结构和定位46-47
• 2．MASPIN与肿瘤抑制47-48
• 3．MASPIN的表达与肿瘤的临床预后48-51
• 结语51
• 参考文献51-56
• 研究生期间发表文章及相关科研成果56-57
• 中英文缩写词表57-58
• 致谢58-59

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