小胶质细胞在EAE小鼠模型中的保护作用研究

发布时间：2017-04-14 05:10

  本文关键词：小胶质细胞在EAE小鼠模型中的保护作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究利用EAE小鼠模型探讨小胶质细胞的神经保护作用。方法:1.本研究用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型,按照随机分组的原则将72只小鼠分为正常对照组、EAE模型组、Tuftsin干预组三组;免疫后第1天用微量注射泵在EAE小鼠皮下缓慢注射500μM Tuftsin对小鼠进行干预治疗,正常对照组与EAE模型组用微量注射泵皮下注射生理盐水。从免疫后第1天开始采用国际公认的神经功能评分标准对各组小鼠进行神经功能评分。2.分别在免疫后第7天、14天、21天及28天处死各组小鼠并取其脑和脊髓组织,行组织病理学LFB染色及MBP免疫组织化学染色,观察并比较各组实验小鼠组织病理学改变的差异;通过RT-PCR方法检测TNF-α、TGF-β、IL-10的含量;Western blot方法测定iba-1蛋白的含量。结果:1.各组小鼠神经功能的变化:正常对照组小鼠均未发现神经功能障碍;EAE模型组和Tuftsin干预组在免疫后第9天相继发病,免疫后21天达到发病高峰期,EAE组较Tuftsin干预组小鼠临床症状明显严重;EAE模型组的平均神经功能评分明显高于Tuftsin干预组。2.各组实验小鼠脊髓组织病理改变:正常对照组在各时间点组织学染色结果显示脊髓组织结构均完整,髓鞘呈蓝色,MBP阳性为棕褐色,无髓鞘的脱失。EAE组小鼠在初始发病期可见到白质区结构疏松,髓鞘染色较淡,髓鞘断裂、不连续;在发病高峰期髓鞘脱失严重;在恢复期,可见少量髓鞘再生;而Tuftsin干预组小鼠脊髓组织髓鞘脱失程度低于EAE模型组。3.同一时间不同实验组各细胞因子的比较发现:在免疫后第14天、21天、28天EAE模型组的IL-10和TGF-b的表达量低于Tuftsin干预组,而TNF-a的表达量却高于Tuftsin干预组。比较同一实验组在不同时间点各细胞因子的变化:EAE模型组和Tuftsin干预组TNF-a、IL-10和TGF-b均随着病程的发展表达量持续升高,EAE模型组TNF-a的表达量明显高于Tuftsin干预组,而IL-10和TGF-b 的表达却明显低于Tuftsin干预组。4.实验小鼠在各时间点脑组织iba-1蛋白表达的变化:对照组有少量iba-1蛋白的表达,在各时期无明显变化。发病前期,EAE模型组和Tuftsin干预组iba-1蛋白的表达与正常对照组无差异。初始发病期,EAE模型组和Tuftsin干预组iba-1蛋白的表达亦显著升高,但Tuftsin干预组iba-1蛋白的表达量高于EAE模型组。直至免疫后第21天及28天,EAE模型组和Tuftsin干预组iba-1蛋白的表达量持续显著升高,且两组相比Tuftsin干预组明显高于EAE模型组。结论:1.Tuftsin干预组小鼠发病率低,起病时间延长,神经功能损害严重程度轻,且恢复较快。2.Tuftsin干预组小鼠脊髓组织的髓鞘脱失程度轻。3.Tuftsin干预组小鼠脑组织中的促炎因子水平低,抗炎因子水平高。4.Tufusin能够促进小胶质细胞的激活及吞噬活性。5.小胶质细胞在Tuftsin的刺激基础上激活,能够从促炎性表型M1转化为抗炎性表型M2,从而发挥抗炎性作用,在EAE中发挥保护作用。
【关键词】：多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 小胶质细胞 促吞噬肽 保护作用
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-332;R744.51
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 1 材料和方法13-21
• 1.1 主要材料和试剂13-14
• 1.1.1 实验动物13
• 1.1.2 制备EAE模型所需抗原及试剂13
• 1.1.3 主要试剂及来源13
• 1.1.4 主要仪器及来源13-14
• 1.2 实验方法14-20
• 1.2.1 动物模型制备14
• 1.2.2 实验动物神经功能评分14-15
• 1.2.3 组织病理学染色15-17
• 1.2.4 实时荧光定量PCR（RT-PCR）17-19
• 1.2.5 Western blot检测19-20
• 1.3 统计学处理20-21
• 2 结果21-32
• 2.1 各组实验小鼠发病情况21-24
• 2.1.1 发病率的比较22
• 2.1.2 平均潜伏期（起病时间）的比较22
• 2.1.3 平均神经功能评分比较22-24
• 2.2 各组实验小鼠脊髓组织病理学结果24-29
• 2.3 各组实验小鼠在不同时期各细胞因子表达量的比较29-31
• 2.4 Tuftsin对EAE模型中小胶质细胞的影响31-32
• 3 讨论32-44
• 3.1 多发性硬化和EAE模型的建立32-33
• 3.2 小胶质细胞的特点及在中枢神经系统脱髓鞘疾病中的作用33-44
• 3.2.1 小胶质细胞的来源及形态33-34
• 3.2.2 小胶质细胞的激活34-35
• 3.2.3 小胶质细胞的分化35-36
• 3.2.4 小胶质细胞的功能36-44
• 4 结论44-45
• 参考文献45-53
• 发表论文和参加科研情况说明53-54
• 综述 小胶质细胞在多发性硬化中的保护作用54-65
• 综述参考文献59-65
• 致谢65-66
• 个人简历66

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本文编号：305262