AQP9与MCTs在脑缺血后的表达变化及其在乳酸转运中的作用

发布时间：2017-04-14 05:19

  本文关键词：AQP9与MCTs在脑缺血后的表达变化及其在乳酸转运中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分 急性脑缺血后AQP9与MCTs的表达变化目的观察AQP9与MCTs在急性脑缺血后的表达变化,探讨其在脑缺血中的作用。方法成年健康雄性SD (Sprague-Dawley)大鼠随机分为缺血组和假手术对照组,用改良永久性大脑中动脉栓塞法(pMCAO)制作脑缺血动物模型,假手术对照组除不插线栓外,其余操作与缺血组相同。每组分别在造模成功后1h、3h、6h、12h、24h取出大鼠脑组织,分别运用TTC染色评估梗塞面积,干湿重法计算脑组织含水量变化,免疫荧光(Immunofluorence)和免疫印迹(Western Blotting)检测各组相应时间点脑组织AQP9和MCTs的表达变化。结果与假手术对照组相比,脑缺血后,脑梗死面积和脑含水量明显升高,并随缺血时间的延长而逐渐增加。免疫荧光和免疫印迹结果显示,AQP9与MCTs在脑缺血后表达增加,且随脑缺血时间的延长而增加。MCAO后,AQP9的表达与脑含水量的变化呈显著正相关(P0.05)。结论脑缺血后,伴随脑水肿的加重,AQP9表达上调,提示脑缺血后,AQP9表达上调是缺血性脑水肿形成的重要因素；AQP9与MCTs在脑缺血后星形胶质细胞和神经元上的表达上调,表明二者可能参与了星形胶质细胞和神经元之间的乳酸转运。第二部分AQP9与MCTs在星形胶质细胞缺血缺氧后的表达变化及其作用目的观察AQP9与MCTs蛋白在星形胶质细胞缺血缺氧后的表达变化,探讨其在缺血缺氧后致细胞损伤中的意义。方法取出生后2天内的SD大鼠大脑皮层培养星形胶质细胞,采用GFAP免疫荧光染色对培养的星形胶质细胞进行鉴定。纯化的星形胶质细胞,一部分建立缺血缺氧损伤模型并随机分为对照组、缺血缺氧组(干预时间为1 h、3 h、6 h)。另一部分加药处理,随机分为正常对照组、加药组,加药组分为：低剂量组(4-CIN:150umol/L),中剂量组(4-CIN:425umol/L)和高剂量组(4-CIN:900umol/L)。采用HE染色观察各组细胞形态学变化,LD试剂盒检测培养液中乳酸含量,运用免疫荧光染色及免疫印迹检测各组细胞中AQP9、MCTs的表达情况。结果与对照组相比,缺血缺氧组细胞随着缺血缺氧时间的延长,细胞核肿大,且部分细胞呈凝固性坏死；细胞培养液中LD含量增高,且与缺氧时间呈正相关(P0.05)。免疫荧光染色和免疫印迹结果显示：与对照组相比,星形胶质细胞缺血缺氧组中AQP9、MCT1、MCT4表达增加,且随缺血缺氧时间的延长其表达逐渐增强(P0.05)。与对照组相比,加药组细胞培养液中的LD含量均增高,AQP9表达上调,而MCT1、4的表达下调(P0.05)。结论缺血缺氧后,星形胶质细胞胞外乳酸浓度与AQP9、MCTs的表达呈正相关,表明缺血缺氧后星形胶质细胞和神经元损伤可能与细胞间的乳酸转运失调有关；而抑制MCTs后,胞外乳酸浓度增加且AQP9的蛋白水平表达增加,推测二者可能在星形胶质细胞缺血缺氧后共同参与乳酸的转运。第三部分AOP9和MCT1、4在人脑胶质瘤细胞U87缺血缺氧后的表达变化目的观察神经胶质瘤细胞U87中MCT1、4与AQP9在缺血缺氧后的表达变化,探讨其在神经胶质瘤乳酸转运中的作用及其临床意义。方法常规培养U87细胞,随机分为对照组和缺血缺氧组,缺血缺氧组干预1h、3h、6h。 MTT法检测细胞的存活率,应用免疫荧光和免疫印迹,检测对照组和缺血缺氧组中AQP9和MCT1、4的表达变化。结果与对照组相比,缺血缺氧组U87细胞形态发生改变,细胞存活率下降,且与缺血缺氧时间呈负相关(P0.05)。免疫荧光和免疫印迹结果显示：与对照组相比,缺血缺氧组中AQP9和MCT1、4的表达均增高,并随缺血缺氧时间增长其表达逐渐增强(P0.05)。结论缺血缺氧后,U87细胞中AQP9和MCT1、4表达增强,提示AQP9可能协同MCT参与神经胶质瘤微环境中乳酸的转运,并与肿瘤细胞的增殖、存活相关。
【关键词】：水通道蛋白9 单羧酸转运蛋白 脑缺血 单羧酸转运蛋白 水通道蛋白9 脑缺血 乳酸 单羧酸转运蛋白(MCT) 水通道蛋白9(AQP9) 胶质瘤 U87 缺血缺氧
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照6-7
• 中文摘要7-12
• 英文摘要12-18
• 第一部分 急性脑缺血后AQP9与MCTs的表达变化18-35
• 前言18
• 1 材料18-22
• 2 方法22-27
• 3 结果27
• 4 讨论27-30
• 参考文献30-32
• 附图32-35
• 第二部分 AQP9与MCTs在星形胶质细胞缺血缺氧后的表达变化及其作用35-51
• 前言35
• 1 材料35-37
• 2 方法37-42
• 3 结果42-43
• 4 讨论43-45
• 参考文献45-47
• 附图47-51
• 第三部分 AQP9与MCT1、4在人脑胶质瘤细胞U87缺血缺氧后的表达变化51-63
• 前言51
• 1 材料51-52
• 2 方法52-54
• 3 结果54-55
• 4 讨论55-58
• 参考文献58-61
• 附图61-63
• 文献综述63-70
• 参考文献67-70
• 致谢70-71
• 攻读硕士期间发表的论文71

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本文编号：305302