高糖诱导SHSY-5Y细胞过表达GIGYF1对IGF1R信号通路的影响

发布时间：2021-03-03 17:42

　　背景糖尿病患者有较高发生认知功能障碍的风险,即糖尿病脑病（DE）。DE在临床上主要表现为慢性脑部疾病,比如认知功能障碍、痴呆和精神障碍。Grb10（生长因子受体结合蛋白10）-相关的GYF蛋白1（GIGYF1）通过与衔接蛋白Grb10的连接可以调节胰岛素生长因子1受体（IGF1R）信号通路,而IGF1R信号通路在调节糖尿病相关的认知功能障碍中扮演着重要的作用。目的初步探究GIGYF1的表达水平在高糖诱导的SHSY-5Y细胞中对IGF1R信号通路及对细胞功能的影响。方法用高糖诱导人类神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y细胞,并用GIGYF1-shRNA慢病毒敲低GIGYF1的表达水平。用Western blot和实时荧光定量PCR实验分别检测SHSY-5Y细胞的GIGYF1、Grb10和IGF1R的蛋白和mRNA的表达水平。用Western blot方法检测磷酸化IGF1R/IGF1R、磷酸化AKT/AKT和磷酸化ERK/ERK的蛋白表达水平。同时,利用Annexin V/PI染色、EdU及细胞划痕实验检测SHSY-5Y细胞的凋亡、增殖和迁移。结果SHSY-5Y细胞的凋亡随着葡萄糖浓度（0-2... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

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【学位级别】：硕士

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感染GIGYF1-shRNASHSY-5Y细胞的白光和荧光图

图 1 感染 GIGYF1-shRNA SHSY-5Y 细胞的白光和荧光图Figure 1. White light and fluorescence of SHSY-5Y cells infected GIGYF1-shRNA virus.2 高糖诱导细胞凋亡并增加 GIGYF1 在 SHSY-5Y 细胞中的表达为了确定高糖对 SHSY-5Y 细胞活力的影响，我们将血清饥饿 1 天的 SHSY胞用不同剂量的葡萄糖或甘露醇(0-200mm)处理 48h 后，用 Annexin VFITC 法细胞凋亡率，以 0mM 浓度的葡萄糖或甘露醇作为对照组。结果表明，随着葡或甘露醇浓度的增加，细胞凋亡率呈上升趋势。此外，甘露醇诱导的细胞凋度明显低于高糖诱导的细胞凋亡程度，且葡萄糖毒性高于甘露醇最为显著时自的浓度为 50mM 时（图 2A-C）。

重庆医科大学硕士研究生学位论文 Annexin V-FITC/PI 染色检测 SHSY-5Y 细胞凋亡;(B)在血清饥饿的 SHSY-5Y 细胞中加浓度的葡萄糖(0-200mm)诱导 48h 后，检测 SHSY-5Y 细胞凋亡，方法与(A)相同;(C)分(A, B)中检测到的 SHSY-5Y 细胞凋亡率(Q2% + Q4%)。结果显示为平均值±SD;所有实立进行三次。*p < 0.05，**p < 0.01，***p < 0.001。然后，我们用相同的方式处理 SHSY-5Y 细胞后检测细胞中 GIGYF1 的 mR蛋白的表达水平。我们发现用 25mM 浓度葡萄糖处理 SHSY-5Y 细胞后，GIG表达水平明显高于其他组(图 3A, B)。为了进一步研究 GIGYF1 的功能，我们SY-5Y 细胞中用三种慢病毒以敲低了 GIGYF1 的表达。实时荧光定量 PCRestern blot 分析结果表明，GIGYF1-shRNA3 能够有效抑制 SHSY-5Y 细胞GYF1 的表达，且最明显(图 3C, D)。所以，我们在接下来的研究中使用这个毒 shRNA 进行后续的实验。


本文编号：3061664