Perifosine通过抑制PI3K/Akt途径调节人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡与自噬
发布时间：2021-03-03 23:47
目的:探讨Akt激酶抑制剂perifosine对人胶质瘤U251细胞凋亡、细胞周期和自噬的影响,确定perifosine诱导的细胞自噬与其促进胶质瘤细胞凋亡的相关性。方法:Perifosine处理U251细胞后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞术分析perifosine对U251细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI双标法检测perifosine对胶质瘤细胞凋亡的作用;免疫印迹法检测细胞内P21、P27和cyclin B1等细胞周期调控相关蛋白以及caspase-9、PARP等细胞凋亡相关蛋白的表达水平;通过观察细胞内自噬标志分子LC3-II的分布与表达来确定perifosine对自噬的诱导作用。结果:Perifosine剂量依赖性地抑制U251细胞活力,能够通过抑制cyclin B1的表达而阻滞胶质瘤细胞周期于G2期。Perifosine促进了U251细胞内caspase-9和PARP的剪切,抑制survivin表达,从而诱导胶质瘤细胞发生凋亡。同时,perifosine与自噬抑制剂氯喹联用后,U251细胞凋亡数量明显增加。结论:Perifosin...
【文章来源】：中国病理生理杂志. 2016,32(04)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
Perifosine诱导U251细胞阻滞于G2期
??4h后，GFP-LC3细胞内的点状分布增加，证实perifosine能够促进胶质瘤细胞自噬的发生，见图6。同时，免疫印迹法检测perifosine对人胶质瘤细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达的影响，发现不同浓度的perifosine处理细胞后，LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显增多，进一步证明perifosine能够诱导U251细胞发生自噬，见图7。Figure4．Theeffectsofperifosinetreatmentatdifferentconcentrationsfor24hontheexpressionofcellcycle-associatedproteinsintheU251cells．CelllysateswereanalyzedbyWesternblot．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vs0μmol/L．图4Perifosine对细胞周期相关蛋白表达水平的影响表2Perifosine促进U251细胞发生凋亡Table2．PerifosineinducedU251cellapoptosis(Mean±SD．n=3)Perifosine(μmol/L)Earlyapoptoticrate(%)Lateapoptoticornecroticrate(%)02．88±0．714．67±0．92102．37±0．597．10±0．26*203．24±0．83*9．66±2．28*408．97±2．11*12．28±3．09**P＜0.05vs0μmol/L．5抑制自噬促进perifosine诱导的U251细胞凋亡CQ是特异性自噬抑制剂，主要抑制细胞内自噬体和溶酶体的融合［6］。U251细胞经CQ(10μmol/L)与perifosine(20μmol/L)联合作用24h后，An-nexinV-FITC/PI双标法检测了细胞凋亡的变化。结果表明抑制自噬促进了perifosine诱导的U251细胞凋亡，见表3。同时免疫印迹结果显示，自噬抑制剂CQ与perifosine联用促进了PAＲP的切割，见图8。·647·
Figure5．Theeffectsofperifosinetreatmentfor24hatdifferentconcentrationsonthelevelsofapoptosis-relatedproteinsintheU251cellsdeterminedbyWesternblot．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vs0μmol/L．图5免疫印迹检测perifosine对U251细胞内凋亡相关蛋白的影响Figure6．ＲepresentativeimagesofGFP-LC3intheU251cellstransfectedwithGFP-LC3plasmid．Aftertransfectionfor24h，thecellsweretreatedwithperifosineforan-other24h．图6Perifosine对U251细胞GFP-LC3融合蛋白表达的影响讨论胶质瘤是成人常见的恶性脑肿瘤，其侵袭性强，术后复发率高。尽管治疗手段不断进步，但中位生存期仍无明显改进。目前胶质瘤的治疗以手术治疗为主，化疗则是常规的辅助治疗方法，但化疗药物的获得性耐药使得化疗效果较差，因此迫切需要寻找新的药物来辅助胶质瘤的手术治疗。PI3K/Akt信号通路广泛存在于细胞中，通过调节细胞周期和细胞能量代谢等多种途径发挥重要的生理功能。研究发现，PI3K/Akt信号途径在胶质瘤中过度活化［7-8］，提示该通路与胶质瘤的发生发展关系密切，而PI3K和Akt激酶或许成为胶质瘤临床治疗的有效靶点。Perifosine作为新型的Akt抑制剂，能够通过抑制Akt和细胞外信号调节激酶1/2(extracellularsig-nal-regulatedkinase1/2，EＲK1/2)的磷酸化而抑制小·648·
本文编号：3062159
【文章来源】：中国病理生理杂志. 2016,32(04)北大核心
【文章页数】：7 页
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Perifosine诱导U251细胞阻滞于G2期
??4h后，GFP-LC3细胞内的点状分布增加，证实perifosine能够促进胶质瘤细胞自噬的发生，见图6。同时，免疫印迹法检测perifosine对人胶质瘤细胞内LC3-Ⅱ蛋白表达的影响，发现不同浓度的perifosine处理细胞后，LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显增多，进一步证明perifosine能够诱导U251细胞发生自噬，见图7。Figure4．Theeffectsofperifosinetreatmentatdifferentconcentrationsfor24hontheexpressionofcellcycle-associatedproteinsintheU251cells．CelllysateswereanalyzedbyWesternblot．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vs0μmol/L．图4Perifosine对细胞周期相关蛋白表达水平的影响表2Perifosine促进U251细胞发生凋亡Table2．PerifosineinducedU251cellapoptosis(Mean±SD．n=3)Perifosine(μmol/L)Earlyapoptoticrate(%)Lateapoptoticornecroticrate(%)02．88±0．714．67±0．92102．37±0．597．10±0．26*203．24±0．83*9．66±2．28*408．97±2．11*12．28±3．09**P＜0.05vs0μmol/L．5抑制自噬促进perifosine诱导的U251细胞凋亡CQ是特异性自噬抑制剂，主要抑制细胞内自噬体和溶酶体的融合［6］。U251细胞经CQ(10μmol/L)与perifosine(20μmol/L)联合作用24h后，An-nexinV-FITC/PI双标法检测了细胞凋亡的变化。结果表明抑制自噬促进了perifosine诱导的U251细胞凋亡，见表3。同时免疫印迹结果显示，自噬抑制剂CQ与perifosine联用促进了PAＲP的切割，见图8。·647·
Figure5．Theeffectsofperifosinetreatmentfor24hatdifferentconcentrationsonthelevelsofapoptosis-relatedproteinsintheU251cellsdeterminedbyWesternblot．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vs0μmol/L．图5免疫印迹检测perifosine对U251细胞内凋亡相关蛋白的影响Figure6．ＲepresentativeimagesofGFP-LC3intheU251cellstransfectedwithGFP-LC3plasmid．Aftertransfectionfor24h，thecellsweretreatedwithperifosineforan-other24h．图6Perifosine对U251细胞GFP-LC3融合蛋白表达的影响讨论胶质瘤是成人常见的恶性脑肿瘤，其侵袭性强，术后复发率高。尽管治疗手段不断进步，但中位生存期仍无明显改进。目前胶质瘤的治疗以手术治疗为主，化疗则是常规的辅助治疗方法，但化疗药物的获得性耐药使得化疗效果较差，因此迫切需要寻找新的药物来辅助胶质瘤的手术治疗。PI3K/Akt信号通路广泛存在于细胞中，通过调节细胞周期和细胞能量代谢等多种途径发挥重要的生理功能。研究发现，PI3K/Akt信号途径在胶质瘤中过度活化［7-8］，提示该通路与胶质瘤的发生发展关系密切，而PI3K和Akt激酶或许成为胶质瘤临床治疗的有效靶点。Perifosine作为新型的Akt抑制剂，能够通过抑制Akt和细胞外信号调节激酶1/2(extracellularsig-nal-regulatedkinase1/2，EＲK1/2)的磷酸化而抑制小·648·
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