KCNQ1OT1调控miR-200a/FOXO3/ATG7介导急性缺血性脑卒中的分子机制研究

发布时间：2021-03-04 10:48

　　目的:脑血管病是目前世界上影响人类健康,威胁生命的主要疾病之一。我国每年约有250万新增脑血管病患者。与欧美相比,我国脑血管病发病率和死亡率远高于心血管疾病。缺血性卒中（ischemic stroke,IS）是指因脑部血液循环障碍,缺血、缺氧所致的局限性脑组织的缺血性坏死或软化。缺血性卒中是脑血管病中的一大重要分类,约占我国脑血管病患者的80%,该病致残致死率高,耗费了大量的社会及医疗资源,同时给病患带来了极大的身心痛苦。目前血管再通是缺血性卒中的核心治疗手段。在有效时间窗内进行静脉溶栓或机械取栓治疗,可以挽救处于灌注临界状态的缺血半暗带区细胞,从而减轻患者神经功能障碍,降低致残致死率,提高生存率,最终改善患者的生活质量及预后。然而由于早期诊断条件和治疗时间窗的限制,目前能够接受血管再通治疗的患者仍为少数。此外,缺血/再灌注损伤的发生导致治疗效果并不理想。因此,在分子水平上探索一种的敏感且特异的有助于急性缺血性脑卒中早期诊断、治疗以及评估预后的指标是亟待解决的难题。缺血继发的神经细胞死亡是脑卒中致残致死的首要原因。脑缺血后氧糖消耗,维持细胞和组织正常结构和功能的能量供应减少,导致一系列... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :KCNQ1OT1 在急性缺血性脑卒中患者外周血中表达水平及意义
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验用人外周血标本
            2.1.2 主要试剂
        2.2 实验方法
            2.2.1 临床研究对象的基本信息及外周血血浆收集
            2.2.2 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
    3 结果
        3.1 急性缺血性脑卒中患者KCNQ1OT1 表达水平升高
        3.2 外周血血浆KCNQ1OT1 表达水平与患者急性脑卒中严重程度密切相关
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :KCNQ1OT1 调控缺血再灌注损伤诱导自噬的分子机制研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物和细胞
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器设备
            2.1.4 主要溶液及试剂配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 小鼠短暂性大脑中动脉闭塞模型（Transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO）
            2.2.2 脑立体定位仪下侧脑室注射
            2.2.3 神经行为学评分
            2.2.4 脑梗死体积测量
            2.2.5 细胞复苏、培养、传代、冻存
            2.2.6 细胞氧糖剥夺-复氧（Oxygen and glucose deprivation and re-oxygenation,OGD/R）模型构建
            2.2.7 细胞转染
            2.2.8 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）
            2.2.9 蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测FOXO3、ATG7、LC3B和SQSTM1 蛋白水平表达
            2.2.10 细胞活力检测
            2.2.11 细胞凋亡检测
            2.2.12 免疫荧光染色
            2.2.13 透射电镜下观察
            2.2.14 腺病毒转染
            2.2.15 双荧光素酶报告基因分析
            2.2.16 染色质免疫共沉淀（CHIP）检测
            2.2.17 统计学分析
    3 结果
        3.1 tMCAO造模小鼠体内KCNQ1OT1 表达水平上升
            3.1.1 tMCAO造模小鼠血浆KCNQ1OT1 表达水平上升
            3.1.2 tMCAO造模小鼠局部脑组织中KCNQ1OT1 表达水平上升
            3.1.3 tMCAO组小鼠血浆及局部脑组织中KCNQ1OT1 表达相关性
        3.2 MCAO造模小鼠局部脑组织自噬激活
        3.3 降低KCNQ1OT1 表达减轻tMCAO小鼠脑组织损伤且抑制自噬
            3.3.1 KCNQ1OT1 表达降低能够减轻tMCAO小鼠脑组织损伤
            3.3.2 KCNQ1OT1 表达降低能够抑制tMCAO小鼠脑组织中自噬
        3.4 KCNQ1OT1 通过调节自噬对OGD/R损伤的神经元起保护作用
            3.4.1 KCNQ1OT1 通过调节自噬反应影响OGD/R损伤的神经元细胞活力
            3.4.2 KCNQ1OT1 通过调节自噬反应影响OGD/R损伤的神经元凋亡
        3.5 miR-200a促进OGD/R损伤后神经元存活
        3.6 KCNQ1OT1 表达降低通过上调miR-200a抑制自噬
            3.6.1 KCNQ1OT1 负性调控miR-200a表达
            3.6.2 KCNQ1OT1与miR-200a直接结合调控自噬
        3.7 FOXO3在OGD/R损伤的神经元中上调并调节自噬
        3.8 miR-200a通过与FOXO33’-UTR区域靶向结合调控OGD/R损伤诱导的神经元自噬
            3.8.1 miR-200a调控OGD/R损伤后FOXO3 蛋白表达
            3.8.2 miR-200a通过靶向结合FOXO33’-UTR区域调控OGD/R诱导的自噬
        3.9 ATG7 参与OGD/R损伤后FOXO3 介导的自噬调节
            3.9.1 OGD/R损伤后ATG7 蛋白表达受到FOXO3 调节
            3.9.2 FOXO3 能够靶向调控ATG7 蛋白表达
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Dynamic changes in neuronal autophagy and apoptosis in the ischemic penumbra following permanent ischemic stroke[J]. Yi-hao Deng,Hong-yun He,Li-qiang Yang,Peng-yue Zhang.  Neural Regeneration Research. 2016(07)
[2]Intermittent hypoxia attenuates ischemia/reperfusion induced apoptosis in cardiac myocytes via regulating Bcl-2/Bax expression[J]. JIAN WEN DONG, HAI FENG ZHU, WEI ZHONG ZHU, HAI LEI DING, TIE MIN MA, ZHAO NIAN ZHOU 1 Laboratory of Hypoxic Cardiovascular Physiology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China.2 Department of Physiology and Pathophysiology, Health Science Center Peking University, Beijing 100083 China.  Cell Research. 2003(05)



本文编号：3063082