缺血后处理的神经保护作用及其相关机制研究

发布时间：2021-03-10 22:00

　　目的:在缺血性卒中的发病机制中,缺血脑组织内的局部炎症以及全身免疫抑制作用起着关键的作用,但是对于缺血后处理（Ischemia postconditioning,IPostC）是如何影响缺血脑组织的局部炎症及中枢和外周免疫细胞的研究较少,相关机制还不十分明确。在本研究中,我们利用C57/BL6小鼠建立了IPostC模型,探索IPostC的神经保护作用。通过使用质谱流式细胞技术（CyTOF）,量化了缺血再灌注损伤后的免疫细胞表型,研究细胞表面标记物的表达水平的变化,明确外周血和脑组织中免疫细胞相关的信号通路与缺血性卒中引起的神经炎症之间的关系。进一步阐述缺血后处理是如何影响缺血脑组织免疫细胞的浸润,以及与卒中诱导的免疫抑制相关的淋巴细胞减少症。在脑缺血再灌注损伤中,氧化应激起着重要的作用。富马酸二甲酯及其代谢产物富马酸单甲酯是抗氧化剂,可以通过激活核因子红细胞-2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）途径从而诱导下游抗氧化蛋白的表达。在本研究中,我们进一步阐述了DMF在缺血性卒中急性和亚急性期对再灌注损伤的作用,以及这种作用是否与Nrf2途径的激活相关。鉴于DMF与MMF有... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

IPostC减小梗死体积和改善神经功能缺损评分

外侧纹状体（区域 2）。侧支循环供应示意图。（C）在缺血 15 分钟时，只有轻微的皮质下损伤，见于背外侧纹状体。缺血 30 分钟时，梗死迅速增加并且明显在腹内侧纹状体。缺血 45 分钟时观察到严重的皮质损伤。1.2.3 缺血后处理抑制了脑内病灶侧皮层区域的炎症水平为了进一步明确缺血后处理是否能有效减轻脑内不同区域的炎症水平，我们将小鼠脑组织分为病灶侧皮层和病灶侧基底节区两部分。结果表明，在梗死侧半球，皮层的炎症因子升高的水平要高于基底节区，IPostC明显抑制了同侧皮层TNF-α，IL-1β，IL-6的表达水平。只有CCL2在同侧皮层和基底节都被抑制（图4）。我们的结果提示，在脑缺后，梗死侧皮层的炎症反应最活跃，这可能跟这一区域侧枝循环丰富，再灌注损伤更加严重有关，而IPostC可以明显抑制这一区域的炎症水平。

质谱流式细胞仪的核心是两个实验平台的融合：流式细胞术和元素质谱分析法（图 1）。常规流式细胞术利用荧光团作为标记，通过量化发射光来定量分析分子的表达。但是，荧光团发射光谱较宽，相互间有重叠，当单一实验中有多个参数时就更难以区分，因此需要复杂的补偿计算来解决光谱重叠问题。相反，元素质谱是能够精准的区分不同原子量的同位素。质谱流式细胞术利用了耦合探针与稳定的重金属同位素相连。从而将特定质谱通道中检测到的离子信号转变成分子信号表达，几乎没有参数间的信号重叠，省去了复杂的补偿计算。当进行质谱流式细胞实验时，感兴趣的细胞首先与具有亲和力的抗体混合物进行孵育。这些抗体先前已被结合到纯化的稳定的重金属同位素上[91, 92]。这些探针与目的细胞表面和/或细胞内结合。然后将单细胞悬液通过喷雾器进入质谱流式细胞仪中。进入仪器后，细胞穿过氩气等离子体，其中共价键被打破，产生自由离子。离子云通过一个四极杆以去除共同的生物元素，富集成重金属信号离子，在质谱仪中通过它们的质荷比分开。离子计数转换为电信号，这些信号被整合转化为单细胞事件供分析（图 5）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Inflammation, oxidative stress and renin angiotensin system in atherosclerosis[J]. Kazim Husain,Wilfredo Hernandez,Rais A Ansari,Leon Ferder.  World Journal of Biological Chemistry. 2015(03)



本文编号：3075348