miRNA-128-3p靶向调控Musashi-1抑制髓母细胞瘤生长的机制研究

发布时间：2021-03-20 07:14

　　背景:髓母细胞瘤（medulloblastoma,MB）是儿童脑内最常见的恶性肿瘤。MB发生率占所有儿童脑肿瘤的近10%。MB具有高侵袭、易扩散、难根治等特点。目前髓母细胞瘤的治疗包括手术的完全切除及术后全脑和脊髓的放疗、化疗。随着治疗手段的日益进步,5年生存率提高到50-80%,但术后放疗、化疗造成儿童认知功能障碍,出现严重的不良预后。现急需进一步探索MB的发病机制,并开发新的、有效且副作用较小的治疗方法。随着miRNA在疾病中的作用及机制的发现,miRNA在MB中的功能和作用被逐渐揭秘。已证明miRNA-128-3p在多种疾病及肿瘤中表达下调,并与疾病的发生、发展及预后相关。但miRNA-128-3p对MB发生、发展中的影响及其机制仍需进一步研究。目的:1.通过生物信息学查找MB组织中差异表达miRNA,分析miRNA-128-3p在MB组织中的表达。2.选择DAOY细胞为研究对象研究miRNA-128-3p对MB细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。3.预测并验证miRNA-128-3p的靶基因,研究miRNA-128-3p抑制MB生长的分子机制。方法:1.利用生物信息学网站筛选出m... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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髓母细胞瘤数据库中miRNA差异表达聚类热图

miRNA-128-3p靶向调控Musashi-1抑制兰州大学硕士学位论文髓母细胞瘤生长的机制研究202.5实验结果2.5.1转染效率验证我们将miRNA-128-3pmimic转染DAOY细胞，设定转染时间为24h、48h、72h、96h，选择U6为内参，用qRT-PCR对细胞内的miRNA-128-3p进行定量分析。结果显示DAOY细胞在50nMmiRNA-128-3pmimic浓度转染下，转染24h、48h、72h、96h后miRNA-128-3p分别上升了238倍、569倍、297倍、165倍。DAOY细胞在100nMmiRNA-128-3pmimic浓度转染下，转染24h、48h、72h、96h后miRNA-128-3p分别上升了83倍、259倍、255倍、93倍。miRNA-128-3p在50nM和100nM浓度转染后，可以稳定存在72h，甚至达到96h。见图2-1。miRNA-128-3pmimic转染组和阴性对照组（NC组）有明显的统计学差异。我们选择50nMmiRNA-128-3pmimic浓度作为细胞功能实验的转染浓度。图2-150nM和100nMmiRNA-128-3pmimic转染DAOY细胞24h、48h、72h、96h后，qRT-PCR实验检测表达量。（*）=p＜0.05。2.5.2细胞划痕实验转染后48h，细胞划痕后24h和48h拍照并分析，miRNA-128-3p转染组的24h细胞迁移率为（30.4±5.35）%，48h细胞迁移率为（37.58±10.12）%，阴性对照（NC）组24h细胞迁移率为（48.01±5.87）%，48h细胞迁移率为（75.36±3.41）%，经过SPSS23.0和Graphpad8.0软件分析统计，24h有统计学差异P＜0.05，48h有明显统计学差异P＜0.01。见图2-2。miRNA-128-3p可抑制MBDAOY细胞迁移。

miRNA-128-3p靶向调控Musashi-1抑制兰州大学硕士学位论文髓母细胞瘤生长的机制研究23图2-4A：50nMmiRNA-128-3p转染DAOY细胞迁移和侵袭情况（400倍）；B：细胞迁移定量结果；C：细胞侵袭定量结果。（**）=p＜0.01。2.5.5流式细胞实验DAOY细胞转染50nMmiRNA-128-3pmimic和阴性对照（NC），转染后48h，流式细胞仪检测转染组凋亡率为（18.89±9.62）%，NC组凋亡率为（5.64±1.03）%，转染组和NC组具有显著统计学差异，p＜0.01。见图2-5。细胞早期凋亡和晚期凋亡都存在差异，结果表明，miRNA-128-3p能都诱导MBDAOY细胞发生凋亡。


本文编号：3090595