血脂康对实验性自身免疫性神经炎的治疗潜能

发布时间：2017-04-15 23:03

  本文关键词：血脂康对实验性自身免疫性神经炎的治疗潜能，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的格林巴利综合征(Guillain-Barre syndrome, GBS),又称急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病,是常见的脊神经和周围神经的脱髓鞘疾病,是一种神经系统自身免疫性疾病,其发病机制为分子模拟理论,即外源性感染因子上存在与正常组织成分结构相同或相近的共同抗原表位,抗感染免疫去除感染因子的同时产生自身抗体,损害神经组织。实验性自身免疫性神经炎(Experimental autoimmune neuritis, EAN)是一种主要由CD4+T细胞介导的,累及外周神经系统(peripheral nervous system, PNS)的急性炎症性脱髓鞘性疾病,其在发病机制、临床表现、神经病理学改变及电生理等诸多方面,同人类GBS极为相似,因此已被国际上公认为研究GBS的理想动物模型。应用周围神经髓鞘蛋白或其组成成分P2或PO蛋白或其肽与完全弗氏佐剂共同免疫敏感动物可成功诱导EAN模型。体液免疫和细胞免疫均参与其发病机制。血脂康胶囊是由特制红曲发酵而成,含13种天然莫纳可林(Monaco lin),为他汀同系物,发挥调脂作用。其主要成分为洛伐他汀,还含有多种不饱和脂肪酸以及必需氨基酸,但其对HMG-CoA还原酶活性的抑制优于洛伐他汀。他汀类药物是3-羟基-3甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的抑制剂,通过阻断甲羟戊酸途径抑制胆固醇的合成,临床上主要用于降低低密度脂蛋白。目前越来越多的研究集中于他汀类药物与自身免疫病间的关系,如多发性硬化和类风湿关节炎等。本课题组前期研究发现阿托伐他汀通过抑制Thl和Th17免疫反应,下调细胞表面共刺激分子表达并上调淋巴结单个核细胞中Treg细胞的比例从而缓解了EAN病情。而阿托伐他汀修饰的树突状细胞疫苗可以诱导重症肌无力大鼠免疫耐受,其机制包括增加了CD4+CD25+Treg的比例及Foxp3的表达、抑制淋巴细胞增生、诱导T细胞分泌的Th1/Th17型细胞因子向Th2型细胞因子转化以及减弱血清中抗R97-116肽IgG抗体的产生。然而血脂康作为传统降脂中药,其所含成分虽含他汀却又与他汀类药物不尽相同。本研究通过构造实验性自身免疫性神经炎动物模型,阐明血脂康诱导EAN免疫耐受的机制,为临床应用血脂康治疗GBS提供实验和理论基础。材料与实验方法：1.1材料1.1.1实验动物：雌性Lewis大鼠,6-8周龄,体质量155～185 g。1.1.2主要试剂：抗原为周围髓鞘蛋白(P0)抗原180～199肽段。1.2实验方法1.2.1 EAN模型的诱导及临床评分于每只大鼠双后足垫皮下给予200μL抗原乳液(含200μgP0180-199肽,1.5mg H37Ra结核杆菌,不完全弗氏佐剂),每侧100μL,免疫当天记为第0天。采用双盲评估法,自免疫当天开始每天评测大鼠临床症状并记录体质量,至免疫后第16天(临床症状达高峰时)。临床评分标准为0级：正常；1级：尾部无力；2级：轻度后肢瘫痪；3级：中度后肢瘫痪；4级：重度后肢瘫痪5级：四肢瘫。以每个时间点的平均数表示实验结果。1.2.2血脂康治疗EAN15只大鼠随机分为对照组、小剂量治疗组(200 mg/kg/day)和大剂量治疗组(1000 mg/kg/day)。自免疫后第五天开始每天给予血脂康灌胃治疗,直至免疫后第16天。对照组给予等体积的0.9%生理盐水灌胃处理。1.2.3淋巴结单个核细胞悬液的制备免疫后第16天麻醉大鼠,无菌条件下取双侧腹股沟淋巴结制备淋巴结单个核细胞悬液。用完全培养基调整细胞密度为2×106个/mL。1.2.4胞内细胞因子流式检测取淋巴结单个核细胞悬液,分别加入PE标记的抗大鼠IL-10和TNF-α及FITC标记的IL-17A和IFN-γ抗体,避光,于4℃环境下孵育30 min后重悬上机检测。1.2.5流式检测Treg细胞情况取淋巴结单个核细胞悬液,加入FITC标记的CD4抗体和PE标记的CD25抗体,4℃下孵育30 min。洗涤后加入固定/破膜工作液并混匀,4℃下避光孵育过夜。洗涤细胞后加入PE-Cy5标记的Foxp3抗体,4℃孵育30 min。细胞重悬过滤后上机检测。1.3统计学处理采用spss 22.0统计软件分析,结果以均数±标准差表示,应用单因素方差分析(one-factor analysis of variance, ANOVA)比较3组标本的组间差异,p0.05为差异有统计学意义。结果：1血脂康治疗组临床评分降低2血脂康抑制了细胞因子TNF-α、IL-10和IL-17的分泌3血脂康下调了淋巴结单个核细胞中CD4+CD25+T细胞和CD4+Foxp3+T细胞比例结论：血脂康通过抑制了细胞因子TNF-α、IL-10和IL-17的产生及CD4+T细胞向Treg分化,缓解了EAN大鼠病情。
【关键词】：血脂康 格林巴利综合征 实验性自身免疫性神经炎 调节性T细胞 细胞因子
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R745.43
【目录】：

• 中文摘要6-10
• ABSTRACT10-14
• 符号说明14-16
• 前言16-17
• 材料与方法17-22
• 结果22-23
• 讨论23-37
• 结论37-38
• 附图38-42
• 参考文献42-53
• 致谢53-54
• 攻读学位期间发表的学术论文目录54-55
• 学位论文评阅及答辩情况表55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王慧力;唐长华;王芳;;血脂康不良反应[J];中国误诊学杂志;2010年06期

  本文关键词：血脂康对实验性自身免疫性神经炎的治疗潜能，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：309444