敲低ACC1在胶质瘤细胞迁移侵袭中的作用及其机制研究
发布时间：2021-03-25 13:28
背景胶质瘤是中枢神经系统常见的恶性肿瘤,且极易脑内转移,为根治性切除及有效的局部放疗带来极大困难。肿瘤细胞代谢及相关代谢酶的变化已证明与肿瘤的发生发展密切相关。虽然TCGA数据库显示,乙酰辅酶A羧化酶1（Acetyl-CoA carboxylation1,ACC1）mRNA在胶质瘤表达水平较正常脑组织显著降低,但ACC1如何影响胶质瘤的发生发展尚未见报道。本文旨在探讨ACC1对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响及其可能的机制,为胶质瘤细胞的能量代谢与肿瘤发生发展间的关系提供更全面的理论基础。目的本研究通过敲低胶质瘤细胞U251中ACC1,阐明ACC1与胶质瘤细胞迁移和侵袭的相关性,为认识细胞的能量代谢与胶质瘤发生发展间的关系提供新视角。方法选择人神经胶质瘤U251细胞系。首先,通过慢病毒转染技术敲低U251细胞中的ACC1,并通过Transwell迁移/侵袭实验及划痕实验检测敲低ACC1后对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western blot实验检测相关迁移和侵袭蛋白Vimentin,Fibronectin及uPA的表达水平;然后,通过流式细胞仪检测细胞中活性氧（Reactive oxygen ...
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
敲低ACC1促进U251细胞的迁移和侵袭能力
新乡医学院硕士学位论文35不同视野中的迁移细胞进行计数，y轴代表来自3次独立实验的迁移细胞数，x轴代表不同的细胞；图1E，Transwell侵袭实验，细胞在包被了BDMatrigel基质胶的24孔板培养24h后，用4%多聚甲醛固定，结晶紫染色后在倒置显微镜下观察侵袭的细胞，并选择5个不同的视野进行拍照，图中所示为侵袭细胞的相差显微镜图像；图1F，对5个不同视野中的迁移细胞进行计数，y轴代表来自3次独立实验的迁移细胞数，x轴代表不同的细胞；图1G，划痕实验，观察在不同的时间点U251细胞的划痕愈合能力；图1H，对迁移到划痕区域的细胞进行计数，y轴代表来自3次独立实验的迁移细胞数，x轴代表不同的时间点。Bar=100μm。图1B，D，F和H中的数据表示为平均值±SD，P**＜0.01。图2敲低ACC1的U251细胞相关迁移和侵袭蛋白及H3K9ac表达增加。注：图2A，Westernblot实验检测相关蛋白ACC1、Vimentin、Fibronectin和uPA的表达，GAPDH被用作样品的加样对照；图2B为蛋白灰度值统计结果，y轴代表相对蛋白表达量，x轴代表不同的蛋白。图2C，Westernblot实验检测H3K9ac蛋白表达，GAPDH被用作样品的加样对照；图2D为蛋白灰度值统计结果，y轴代表相对蛋白表达量。数据表示为平均值±SD，P**＜0.01。
新乡医学院硕士学位论文36图3敲低ACC1的U251细胞中ROS水平增加。注：图3A，流式细胞术检测敲低ACC1的U251细胞中ROS的水平；图3B为荧光强度统计结果，y轴代表平均荧光强度。数据表示为平均值±SD，P*＜0.05。图4抗氧化剂NAC可以使敲低ACC1的U251细胞中ROS水平降低。注：图4A，流式细胞术检测NAC作用后敲低ACC1的U251细胞中ROS的水平；图4B为荧光强度统计结果，y轴代表平均荧光强度。数据表示为平均值±SD，与对照组相比P*＜0.05，与敲低ACC1组相比P#＜0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Oxidative stress: the lowest common denominator of multiple diseases[J]. Veronika Matschke,Carsten Theiss,Johann Matschke. Neural Regeneration Research. 2019(02)
[2]乙酰辅酶A羧化酶与恶性肿瘤相关性的研究进展[J]. 李妹,狄文. 上海医学. 2011(11)
本文编号：3099766
【文章来源】：新乡医学院河南省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
敲低ACC1促进U251细胞的迁移和侵袭能力
新乡医学院硕士学位论文35不同视野中的迁移细胞进行计数，y轴代表来自3次独立实验的迁移细胞数，x轴代表不同的细胞；图1E，Transwell侵袭实验，细胞在包被了BDMatrigel基质胶的24孔板培养24h后，用4%多聚甲醛固定，结晶紫染色后在倒置显微镜下观察侵袭的细胞，并选择5个不同的视野进行拍照，图中所示为侵袭细胞的相差显微镜图像；图1F，对5个不同视野中的迁移细胞进行计数，y轴代表来自3次独立实验的迁移细胞数，x轴代表不同的细胞；图1G，划痕实验，观察在不同的时间点U251细胞的划痕愈合能力；图1H，对迁移到划痕区域的细胞进行计数，y轴代表来自3次独立实验的迁移细胞数，x轴代表不同的时间点。Bar=100μm。图1B，D，F和H中的数据表示为平均值±SD，P**＜0.01。图2敲低ACC1的U251细胞相关迁移和侵袭蛋白及H3K9ac表达增加。注：图2A，Westernblot实验检测相关蛋白ACC1、Vimentin、Fibronectin和uPA的表达，GAPDH被用作样品的加样对照；图2B为蛋白灰度值统计结果，y轴代表相对蛋白表达量，x轴代表不同的蛋白。图2C，Westernblot实验检测H3K9ac蛋白表达，GAPDH被用作样品的加样对照；图2D为蛋白灰度值统计结果，y轴代表相对蛋白表达量。数据表示为平均值±SD，P**＜0.01。
新乡医学院硕士学位论文36图3敲低ACC1的U251细胞中ROS水平增加。注：图3A，流式细胞术检测敲低ACC1的U251细胞中ROS的水平；图3B为荧光强度统计结果，y轴代表平均荧光强度。数据表示为平均值±SD，P*＜0.05。图4抗氧化剂NAC可以使敲低ACC1的U251细胞中ROS水平降低。注：图4A，流式细胞术检测NAC作用后敲低ACC1的U251细胞中ROS的水平；图4B为荧光强度统计结果，y轴代表平均荧光强度。数据表示为平均值±SD，与对照组相比P*＜0.05，与敲低ACC1组相比P#＜0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Oxidative stress: the lowest common denominator of multiple diseases[J]. Veronika Matschke,Carsten Theiss,Johann Matschke. Neural Regeneration Research. 2019(02)
[2]乙酰辅酶A羧化酶与恶性肿瘤相关性的研究进展[J]. 李妹,狄文. 上海医学. 2011(11)
本文编号：3099766
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