MRTF-A参与诱导脑胶质瘤细胞分化的研究

发布时间：2021-03-26 14:02

　　脑胶质细胞瘤是最常见的神经系统的肿瘤,国内统计脑肿瘤中胶质细胞瘤发病率最高。MRTF-A是血清反应因子（SRF）的协同转录因子,它与SRF相互作用进一步调控启动子上含有CArG bo位点的下游基因的转录。对MRTF-A参与脑胶质细胞瘤分化进行研究,具有重要的基础理论研究意义和临床防治的现实价值。本论文利用细胞、分子生物学等技术,对MRTF-A参与脑胶质瘤细胞的分化进行研究。主要研究内容与结果如下利用免疫荧光和RT-PCR法,证实分离获得的细胞表达神经胶质细胞标志基因胶质纤维酸性蛋白（GFAP）,说明分离获得的细胞为大鼠脑神经胶质细胞。我们分别提取正常大鼠胶质细胞与大鼠脑胶质瘤细胞（C6细胞）的mRNA和蛋白,进行RT-PCR和Western blotting,检测其中MRTF-A、Egr-1、GFAP和Ki67（细胞增殖抗原）基因的mRNA和蛋白表达水平,结果发现,与正常胶质细胞相比,脑胶质瘤细胞高表达Ki67,低表达MRTF-A、Egr-1、GFAP。利用含有5个CArG box位点的Egr-1启动子的荧光素酶报告基因质粒,在COS-7细胞和C6细胞中进行荧光素酶报告活性分析,结果发... 

【文章来源】：天津科技大学天津市

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
1 前言
    1.1 脑胶质瘤的概况
        1.1.1 脑胶质瘤的简介
        1.1.2 脑胶质瘤的特征
        1.1.3 脑胶质瘤的病因
        1.1.4 脑胶质瘤细胞
        1.1.5 脑胶质瘤的危害
    1.2 MRTF-A及其与脑胶质瘤的关系
        1.2.1 MRTF-A和MRTFs简介
        1.2.2 MRTF-A的表达模式
        1.2.3 MRTF-A的结构特点
        1.2.4 MRTF-A与肿瘤等疾病的关系
        1.2.5 MRTF-A与脑胶质瘤细胞分化的关系
    1.3 Egr-1
        1.3.1 Egr-1概况
        1.3.2 Egr-1的表达
        1.3.3 Egr-1基因定位
        1.3.4 Egr-1的特点
        1.3.5 Egr-1与其信号通路
        1.3.6 Egr-1与细胞分化的关系
        1.3.7 Egr-1与脑胶质瘤细胞分化的关系
    1.4 ATRA与脑胶质瘤细胞分化的关系
    1.5 本论文的研究意义及主要研究内容
        1.5.1 研究目的及意义
        1.5.2 研究的主要内容
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物、质粒和细胞
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 主要溶液的配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 SD新生大鼠脑神经胶质细胞的分离培养与纯化
        2.2.2 C6细胞的复苏与培养
        2.2.3 逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）
        2.2.4 质粒的大提制备
        2.2.5 细胞转染
        2.2.6 荧光素酶（luciferase）活性检测
        2.2.7 免疫细胞化学
        2.2.8 细胞蛋白的提取
        2.2.9 Western blot（蛋白质免疫印迹）
        2.2.10 MTT方法
        2.2.11 统计分析方法
3 结果与讨论
    3.1 新生SD大鼠脑神经胶质细胞的分离纯化
    3.2 复苏与培养C6细胞
    3.3 C6与R-PG中GFAP、Ki67、MRTF-A和Egr-1的表达情况
    3.4 MRTF-A激活Egr-1启动子转录活性的研究
    3.5 MRTF-A诱导C6分化
        3.5.1 MRTF-A对C6细胞的形态学影响
        3.5.2 免疫化学方法验证MRTF-A可上调GFAP蛋白的表达
        3.5.3 MRTF-A促进GFAP的mRNA水平、降低Ki67的mRNA水平
        3.5.4 MRTF-A升高GFAP的蛋白水平、降低Ki67的蛋白水平
    3.6 MRTF-A激活Egr-1诱导脑胶质瘤细胞分化的研究
        3.6.1 在MRTF-A诱导脑胶质瘤细胞分化过程中Egr-1mRNA水平升高
        3.6.2 在MRTF-A诱导脑胶质瘤细胞分化过程中Egr-1蛋白水平升高
    3.7 MRTF-A对分化的脑胶质瘤细胞存活的影响
4 结论
5 展望
6 参考文献
7 攻读硕士学位期间发表论文情况
8 致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞分化的影响[J]. 付锐,徐航,涂汉军,罗杰,张力.  现代肿瘤医学. 2010(07)
[2]姜黄素诱导人脑胶质瘤细胞U251分化的实验研究[J]. 方俊杰,杨卫忠,陈春美.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2009(04)
[3]哺乳动物生殖过程中早期生长反应因子1的调节及功能[J]. 梁晓欢,邱娜旋,杨增明.  细胞生物学杂志. 2009(04)
[4]CyclinE,P27在皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义[J]. 李灵,杨红,宋林红,董丹丹,李科.  四川医学. 2009(07)
[5]连续微量培养液胃癌组织块贴壁培养法[J]. 刘国红,柴玉荣,朱晓燕,张钦宪.  肿瘤防治研究. 2008(02)
[6]亚低温对大鼠脑创伤后海马区凋亡相关蛋白表达的影响[J]. 李雪松,荆国杰.  中华神经外科疾病研究杂志. 2005(01)
[7]脑胶质瘤化疗多药耐药机制的研究进展[J]. 吴涛,吴志敏,袁先厚.  肿瘤防治研究. 2004(08)
[8]即刻早期基因Egr-1与肿瘤研究[J]. 蒙国照.  国外医学(分子生物学分册). 2001(03)
[9]脑胶质瘤诱导分化治疗进展[J]. 钟春龙.  上海第二医科大学学报. 1999(06)



本文编号：3101708