PIWIL3/OIP5-AS1/miR-367-3p/CEBPA以及TDP43/SNHG12/miR-195/SOX5反

发布时间：2021-04-16 19:21

　　目的:胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）是神经上皮源性肿瘤,按照WHO病理分级,GBM是恶性程度最高,侵袭性最强的恶性脑胶质瘤。尽管给予积极的手术治疗,并辅助术后放疗和化疗,GBM患者的5年生存率仍小于5%,预后很差。GBM对化疗的耐药性和放疗的抵抗性是影响疗效的重要因素。目前,研究者们从基因组学、遗传学和表观遗传学等多角度研究胶质母细胞瘤的发病机制,针对胶质母细胞瘤发病机制的研究已成为诊断和靶向治疗的关键。非编码RNAs（non-coding RNAs,ncRNAs）人类基因组中的多数基因的转录产物之一。一般分为短链非编码RNAs和长链非编码RNAs（long non-coding RNAs,lncRNAs）。其中,短链非编码RNAs主要包括microRNAs（miRNAs）、short-interfering RNAs（siRNAs）和PIWI-interacting RNAs（piRNAs）。piRNAs一般通过与Argonaute蛋白家族的亚家族,即PIWIL蛋白亚家族结合,发挥基因沉默及调控和维持种系DNA稳定的功能。LncRNAs的生物学功能主要表现在转录或者... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：123 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 PIWIL3/OIP5-AS1/miR-367-3p/CEBPA反馈环调控胶质瘤细胞生物学行为的机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞株
            2.1.2 实验动物
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养与传代
            2.2.2 细胞冻存
            2.2.3 细胞计数
            2.2.4 细胞增殖实验
            2.2.5 细胞迁移实验
            2.2.6 细胞侵袭实验
            2.2.7 细胞凋亡实验
            2.2.8 Trizol法提取RNA
            2.2.9 Real-time PCR方法分别检测OIP5-AS1、CEBPA和 TRAF4 mRNA的表达变化
            2.2.10 慢病毒载体构建和感染
            2.2.11 细胞转染
            2.2.12 双荧光素酶报告基因分析实验
            2.2.13 RNA免疫沉淀技术（RIP）
            2.2.14 RNA pull-down实验
            2.2.15 Western blot方法
            2.2.16 染色质免疫共沉淀（ChIP）实验
            2.2.17 裸鼠移植瘤实验
        2.3 统计方法
    3 实验结果
        3.1 在胶质瘤组织和细胞中PIWIL3和piR-30188 低表达,OIP5-AS1 高表达。过表达PIWIL3、piR-30188 以及沉默OIP5-AS1 的表达抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为
        3.2 PIWIL3 结合piR-30188,OIP5-AS1 靶向结合piR-30188 调节胶质瘤细胞生物学行为。miR-367-3p在胶质瘤组织和细胞中低表达,miR-367-3p靶向结合OIP5-AS1 调控胶质瘤细胞的恶性生物学行为
        3.3 PIWIL3、piR-30188、OIP5-AS1和miR-367-3p通过调控CEBPA和TRAF4影响胶质瘤细胞的生物学行为
        3.4 沉默OIP5-AS1 的表达联合过表达miR-367-3p通过降低CEBPA和 TRAF4的表达抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为
        3.5 CEBPA与 TRAF4 的启动子结合下调其表达,调控胶质瘤细胞的生物学行为
        3.6 miR-367-3p靶向结合CEBPA的3’UTR区,调控胶质瘤细胞的生物学行为
        3.7 CEBPA与 PIWIL3 的启动子区直接结合
        3.8 沉默OIP5-AS1 的表达与过表达PIWIL3、miR-367-3p的单独和联合应用抑制裸鼠移植瘤生长,显著延长生存期
    4 讨论
    5 结论
第二部分 TDP43/SNHG12/miR-195/SOX5 反馈环调控胶质瘤细胞生物学行为的机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞株
            2.1.2 实验动物
            2.1.3 组织标本
            2.1.4 主要试剂
            2.1.5 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞培养与传代
            2.2.2 细胞冻存
            2.2.3 细胞计数
            2.2.4 荧光原位杂交（FISH）
            2.2.5 逆转录和实时定量PCR（qRT-PCR）
            2.2.6 Western blot
            2.2.7 构建转染细胞系
            2.2.8 细胞增殖实验
            2.2.9 细胞迁移实验
            2.2.10 细胞侵袭实验
            2.2.11 细胞凋亡实验
            2.2.12 双荧光素酶报告基因分析实验
            2.2.13 RNA免疫沉淀技术（RIP）
            2.2.14 RNA pull-down实验
            2.2.15 半衰期检测
            2.2.16 染色质免疫共沉淀实验（ChIP）
            2.2.17 裸鼠移植瘤实验
        2.3 统计方法
    3 实验结果
        3.1 TDP43和SNHG12 在胶质瘤组织和细胞中高表达,沉默TDP43和SNHG12抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为,沉默TDP43 抑制SNHG12 的表达
        3.2 过表达miR-195 抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,促进胶质瘤细胞凋亡
        3.3 miR-195与SNHG12 靶向结合,过表达miR-195 抑制SNHG12 的表达
        3.4 过表达miR-195 增强sh-SNHG12 对胶质瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用
        3.5 SOX5 在胶质瘤组织和细胞中高表达,沉默SOX5 抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为
        3.6 miR-195 靶向结合SOX5的3'UTR并负性调控其表达
        3.7 低表达SOX5 能够部分逆转沉默miR-195 的表达对胶质瘤细胞恶性生物学行为的促进作用
        3.8 SOX5与Gelsolin的启动子区结合,沉默SOX5 抑制Gelsolin的表达
        3.9 SOX5与SNHG12 的启动子区结合,沉默SOX5 抑制SNHG12 的表达
        3.10 沉默TDP43 表达、沉默SNHG12 表达和过表达miR-195 单独以及联合应用抑制肿瘤在体内的生长并延长裸鼠生存期
    4 讨论
    5 结论
    本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]lncRNA:肿瘤分子诊断中的一颗新星[J]. 李琪儿,叶国良,郭俊明.  中国生物化学与分子生物学报. 2014(03)
[2]转录因子与microRNA在基因表达调控中的功能联系及差异[J]. 闫晓红,王宁.  中国生物化学与分子生物学报. 2010(10)
[3]小干扰RNA逆转人乳腺癌细胞MCF-7多药耐药的体外研究[J]. 庄晓明,肖红,武卓.  中国临床药理学杂志. 2010(01)
[4]特异性小干扰RNA沉默Annexin Ⅱ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移力的影响[J]. 郭变琴,文阳安,陈婷梅.  重庆医科大学学报. 2009(08)

博士论文
[1]长链非编码RNA DMTF1v4（NR024549）在胃癌多药耐药中的作用及机制研究[D]. 王颖.第四军医大学 2012



本文编号：3142023