上游开放阅读框通过ZNRD1-AS1/miR-499a-5p/ELF1/EMI1途径调控胶质瘤血管生成拟态的机制研究

发布时间：2021-04-17 14:44

　　目的:人类中枢神经系统中80%的恶性原发肿瘤是脑胶质瘤,其预后极差。胶质瘤作为一种血管生成实体瘤,其恶性进展依赖于肿瘤组织中血管的生成。尽管临床上胶质瘤的抗血管生成治疗取得了一些进展,但效果仍不理想。限制抗血管生成疗效的原因之一与胶质瘤细胞的血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）的生成相关。上游开放阅读框（upstream open reading frames,uORFs）,常见于真核生物基因的5′UTR,在翻译起始中发挥重要作用。研究发现,人类44%-49%的基因中存在uORFs,一些基因中的uORF会激活无意义密码子介导RNA降解（Nonsense-mediated RNA Decay,NMD）,进而促进该基因的降解。锌带蛋白基因反义核糖核酸（zinc ribbon domain-containing 1 antisense RNA 1,ZNRD1-AS1）位于6p22.1号染色体上。有证据表明,ZNRD1-AS1在肺癌组织中高表达,并且ZNRD1-AS1和其功能性Cis-eQTL促进肺癌的发生。研究发现ZNRD1-AS1的5′UTR存在编码144个氨基酸... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ZNRD1-AS1的表达及其对胶质瘤细胞生物学行为的影响

中国医科大学硕士学位论文10标准差表示(n=3)。与NHA组比较，**P<0.01。(C)CCK-8法检测ZNRD1-AS1对U87和U251细胞增殖的影响。(D)Transwell法检测ZNRD1-AS1对U87和U251细胞的细胞迁移和侵袭的影响。标度条代表20μm。(E)三维管形成实验检测ZNRD1-AS1对U87和U251细胞的VM的影响。标度条代表50μm。数据以平均值±标准差表示(n=3)。与ZNRD1-AS1(-)NC组比较，**P<0.01。3.2144aa-uORF在脑胶质瘤中低表达，抑制胶质瘤细胞VM形成应用westernblot检测，与NBTs组和NHA组相比，144aa-uORF在脑胶质瘤组织及细胞中低表达(图2a,b)。进一步构建稳定转染144aa-uORF过表达的U87和U251细胞系，检测其对胶质瘤细胞生物学行为的作用。研究结果显示，与144aa-uORF(+)NC组相比，144aa-uORF(+)组均显著抑制了U87和U251细胞的增殖、迁移、侵袭及VM形成能力(图2c-e)。图2.144aa-uORF的表达及其对胶质瘤细胞生物学行为的影响(A)144aa-uORF在NBTs、LGGs和HGGs中的表达水平。数据以平均值±标准差表示(n=12)。与NBTs组比较，**P<0.01。(B)144aa-uORF在NHA、U87和U251细胞中的表达水平。数据以平均值±标准差表示(n=3)。与NHA组比较，**P<0.01。(C)CCK-8法检测ZNRD1-AS1对U87和U251细胞增殖的影响。(D)Transwell法检测144aa-uORF对U87和U251细胞的细胞迁移和侵袭的影响。标度条代表20μm。(E)三维管形成实验检测144aa-uORF对U87和U251细

中国医科大学硕士学位论文12图3.144aa-uORF通过NMD途径降低ZNRD1-AS1稳定性，抑制胶质瘤细胞的恶性行为(A)Westernblots法检测144aa-uORF的转染效率。数据以平均值±标准差表示(n=3)。与144aa-uORF(+)NC组比较，**P<0.01。(B)qRT-PCR分析144aa-uORF调节U87和U251细胞中ZNRD1-AS1的表达。数据以平均值±标准差表示(n=3)。与144aa-uORF(+)NC组比较，**P<0.01。(C)RNA-IP证实了UPF1和ZNRD1-AS1之间的结合作用。通过qRT-PCR测量相对富集。数据以平均值±标准差表示(n=3)。与抗正常IgG组比较，*P<0.05。(D)用Westernblot检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]Elf-1和survivin在非小细胞肺癌组织中的表达及其与肿瘤微血管生成的相关性研究[J]. 杨东霞,李乃娥,马云,韩艳春,时彦.  癌症. 2010(04)
[2]胶质瘤中hTERT、maspin和bFGF表达的相关性及意义[J]. 王东林,王艳芬,施公胜,黄华.  癌症. 2007(06)



本文编号：3143634