KEAP1/NRF2/ARE信号通路调控线粒体自噬在SH-SY5Y氧糖剥夺再灌注损伤中的作用

发布时间：2021-05-16 12:37

　　目的线粒体分裂和融合、线粒体自噬等的调控在维持线粒体稳态中发挥关键作用,而线粒体稳态是维持细胞功能、减轻脑缺血再灌注损伤的关键。本研究旨在探讨脑缺血再灌注过程中KEAP1/NRF2/ARE信号通路的激活及其对线粒体自噬的调控作用。方法我们利用人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧糖剥夺模型模拟脑缺血再灌注损伤,将细胞培养至生长状态良好,密度约70%后,随机分成四个组:（1）正常组（C组）:进行正常培养,不做任何特殊处理;（2）缺血/再灌注组（I/R组）:将细胞氧糖剥夺4h后,恢复氧糖供应继续培养18h,即构建缺血/再灌注模型成功;（3）鸦胆子苦醇+缺血/再灌注组（Bru+I/R组）:缺血缺氧前4h加入KEAP1/NRF2/ARE信号通路抑制剂鸦胆子苦醇（Brusatol,Bru）100nM,随后进行缺血缺氧再灌注过程;（4）赋形剂组（Veh+I/R组）:缺血缺氧前4h加入二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）,因其细胞毒性,将终浓度控制于<0.1%,随后进行缺血缺氧再灌注过程。使用透射电子显微镜来观察线粒体超微结构。Western blot方法检测各组细胞中通路... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1 实验材料
        1.1 实验细胞
        1.2 实验材料与试剂
        1.3 主要仪器与设备
    2 SH-SY5Y细胞的培养及氧糖剥夺模型的建立
    3 实验分组
    4 CCK-8检测细胞的活性
    5 细胞免疫荧光
    6 活细胞/死细胞双染观察细胞生存
    7 流式细胞仪测定细胞凋亡率
    8 透射电镜观察线粒体超微结构
    9 Western blot检测通路和线粒体自噬相关蛋白的表达
        9.1 提取总蛋白
        9.2 提取细胞核蛋白
        9.3 蛋白浓度检测
        9.4 Western Blot
    10 统计学分析
结果
    1 CCK-8检测细胞活力
    2 透射电镜下细胞超微结构变化
    3 自噬相关蛋白和通路相关蛋白的表达
    4 活细胞/死细胞双染检测细胞活力
    5 细胞免疫荧光检测结果
    6 流式细胞术检测细胞凋亡
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]脑泰方对脑缺血/再灌注大鼠海马区Nrf2、HO-1和膜铁转运辅助蛋白表达的影响[J]. 黄娟,廖君,彭熙炜,刘洋,成绍武,秦莉花,邓奕辉,王国佐,贺旭,葛金文.  中国药理学通报. 2017(10)

博士论文
[1]PINK1基因通过线粒体分裂融合途径对脑缺血的神经保护作用[D]. 陈方哲.复旦大学 2013



本文编号：3189703