鞘氨醇激酶-2在原代鼠皮层神经元激活自噬介导缺血耐受

发布时间：2017-04-23 16:15

  本文关键词：鞘氨醇激酶-2在原代鼠皮层神经元激活自噬介导缺血耐受，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究旨在探索鞘氨醇激酶-2(SPK2)是否参与神经元异氟醚预适应激活自噬,进而研究SPK2是否通过激活自噬而保护神经元缺血损伤,初步探索SPK2激活自噬的分子机制。方法:采用体外培养小鼠原代皮层神经元,建立异氟醚预适应(Isoflurane preconditioning,ISO)和缺糖缺氧(oxygen glucose dripivation,OGD)模型。利用si RNA分别干扰原代皮层神经元SPK2和Beclin 1的表达,用慢病毒感染原代皮层神经元实现SPK2过表达。利用免疫荧光和Western blot检测SPK2感染率和蛋白表达;检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达,应用溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)检测自噬流。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)检测SPK2对OGD/R诱导神经元死亡的保护作用,应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)检测自噬在SPK2致神经元缺血耐受中的作用。利用免疫共沉淀检测Beclin1与Bcl-2之间的相互作用。结果:在原代皮层神经元中,ISO增强SPK2和LC3的免疫荧光。SPK2 si RNA降低ISO诱导的LC3II上调,Beclin 1 si RNA也抑制ISO诱导的LC3II上调。神经元慢病毒过表达SPK2使LC3II表达增加,并增加自噬流量,过表达SPK2对神经元的OGD模型具有保护作用,表现为改善神经元形态损伤,增加神经元细胞活力,降低LDH漏出率,而3-MA取消了这种保护作用。过表达SPK2后,Beclin 1 si RNA抑制过表达SPK2诱导的LC3II上调;过表达SPK2后,Beclin 1与Bcl-2相互结合减少。结论:神经元异氟醚预适应上调SPK2并激活自噬。干扰SPK2和Beclin 1取消预适应引起的自噬激活,而过表达SPK2激活自噬,对神经元的缺血损伤具有保护作用。SPK2可能通过解离Beclin 1与Bcl-2,促进Beclin 1释放而诱导自噬。
【关键词】：SPK2 异氟醚 预适应 神经保护 自噬 原代皮层神经元
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 前言8-12
• 第一部分 神经细胞异氟醚预适应对SPK2 和自噬的影响12-26
• 第一节 原代皮层神经元异氟醚预适应上调SPK2 和激活自噬12-18
• 材料与方法12-15
• 实验结果15-17
• 小结17-18
• 第二节 抑制SPK2 对神经细胞自噬激活的影响18-26
• 材料与方法18-21
• 实验结果21-25
• 小结25-26
• 第二部分 过表达SPK2 对神经元自噬激活的影响26-41
• 第一节 SPK2 过表达对神经元自噬激活和缺血损伤的影响26-37
• 材料与方法26-28
• 实验结果28-36
• 小结36-37
• 第二节 神经元过表达SPK2 激活自噬的分子机制37-41
• 材料与方法37-38
• 实验结果38-40
• 小结40-41
• 讨论41-43
• 结论43-44
• 参考文献44-47
• 综述47-58
• 参考文献53-58
• 英文缩写词表58-59
• 攻读学位期间公开发表的论文59-60
• 致谢60-61

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