游离多巴胺对多巴胺能细胞的毒性及其机理研究

发布时间：2021-06-28 10:05

　　已知帕金森病（Parkinson‘s disease,PD）的主要病理是中脑黑质多巴胺能神经元的特异性与持续性死亡,而引起这一死亡的病因机制至今不清楚。众多研究者推测,这一死亡和多巴胺（dopamine,DA）的代谢有密切关系。正常情况下,多巴胺能神经元通过末梢将释放的递质DA重吸收入细胞,与胞内合成的DA一起,由囊泡转运体转运至囊泡中储存,从而避免DA被氧化。当某些原因导致细胞内游离DA上升时,游离DA极易受氧化应激而形成多巴胺醌（dopamine quinone,DAQ）,DAQ可与含巯基的蛋白结合形成醌蛋白而导致细胞毒性,引起多巴胺能神经元的特异性死亡。为验证DA的醌毒性作用和抗醌氧化的细胞保护作用,本论文运用人神经母细胞瘤细胞系（SH-SY5Y）作为多巴胺能细胞模型,研究增加外源游离DA对细胞内醌蛋白的累积效应以及对细胞生存率的影响。在此基础上,探讨DA细胞毒性的可能途径。已知萝卜硫素（sulforaphane,SF）可以诱导醌氧化还原酶（NQO1）的表达,而NQO1具有降低细胞内醌化物的作用,因而论文探讨了SF对DA毒性的预防作用。实验主要分为两部分:首先,我们通过增加外源性... 

【文章来源】：华东师范大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度DA处理后检测SH-SY5Y细胞存活率以不加DA（DA浓度

不同浓度DA分别作用于SH-SY5Y细胞和HEK293细胞后检测细胞存活率以DA浓度0为对照组，分别比较不同浓度DA（80μM,160μM,240μM,320μM,400μM,480μM,1000μM）对细胞存活率的影响

华东师范大学硕士专业学位论文16240μM和320μM出现非常显著和极显著差异（图1.3），结果说明细胞内的游离多巴胺增加在细胞毒性中起重要作用。图1.3DA和RE共同作用后检测SH-SY5Y细胞存活率以只加DA，不加RE为对照组（黑色柱状图），分别比较RE4μM与不同浓度DA（80μM,160μM,240μM,320μM)共同作用（蓝色柱状图）对细胞存活率的影响。以不加RE和DA的空白对照组OD570处测量吸光值为1，比较加入不同浓度DA或RE与DA共同作用后，相应孔在OD570处测量吸光值。其中，横坐标中RE表示只加RE4μM(绿色柱状图)，solvent表示只加了RE的溶剂（黄色柱状图）。本实验重复6次，数据统计结果用mean±SD(**表示P<0.01，***表示P<0.001)。Fig.1.3Theeffectsofdifferentconcentrationsofdopamine(DA),RE4μMtreatmentorbothonSH-SY5Ycellviability(MTT).Theeffectsofdifferentconcentrationsofdopamineoncellviabilitywerecomparedwithcontrolgroup(withoutRE,thebarchartofblack).Theabsorbanceofblankcontrolgroup(withoutDAorRE)atOD570wasas1.AfteraddingdifferentconcentrationsofDA(80μM,160μM,240μM,320μM),RE4μMtreatmentorboth(thebarchartofblue),theabsorbancewasmeasuredatOD570.TheREofabscissarepresentsRE4μMonlyadded(thebarchartofgreen).ThesolventrepresentsthesolventofRE(thebarchartofyellow).Theexperimentwasrepeated6times,andthestatisticalresultswereexpressedasmean±SD(**P<0.01,***P<0.001).


本文编号：3254117