活性多肽对MPTP/MPP + 诱导帕金森病模型的神经保护及机制探究
发布时间：2021-07-13 21:39
目的:帕金森病（parkinson’s disease,PD）是一种常见的神经退行性疾病,多发于中老年。中脑黑质多巴胺（dopamine,DA）能神经元的变性死亡以及残存神经元胞质内嗜酸性包涵体,即路易小体（Lewy body）的出现是PD突出的病理改变。患者的临床表现主要为静止性震颤、运动迟缓、肌强直等一系列运动障碍。随着如今社会老龄化,PD的发病率逐年上升,给患者和社会造成极大的负担。然而目前常用的治疗药物效果较为有限,因此研究和开发防治PD药物具有非常重要的意义。本研究拟用MPP+（1-Methyl-4-Phenylpyridinium,1-甲基-4苯基吡啶离子）诱导SH-SY5Y细胞损伤模型以及MPTP（1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶）诱导小鼠帕金森病模型,探讨一种活性多肽对PD的神经保护作用及具体的作用机制,为PD的治疗提供理论依据。方法:本研究以MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤建立PD细胞模型,以C57BL雄性小鼠腹腔注射MP...
【文章来源】：广东药科大学广东省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度的MPP+对细胞存活率的影响
广东药科大学硕士研究生学位论文17如图3-1所示，细胞在加入MPP+培养24h后，随着MPP+浓度的增加，细胞存活率明显降低。当MPP+浓度为4mM时，细胞存活率约为50%，故选用此浓度用于后续实验研究。图3-1不同浓度的MPP+对细胞存活率的影响Fig.3-1EffectofMPP+withdifferentconcentrationoncellsurvivalrate注：与对照组相比，*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001（2）活性多肽对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用通过MTT法对三种不同的多肽的细胞毒性作用进行检测，如图3-2所示，不同浓度的多肽对细胞的存活率没有明显的影响，其中PP-2在200μM时，有一定的抑制作用，PP-1和PP-3在浓度为400μM时，有一定的抑制作用。图3-2不同浓度的多肽对细胞存活率的影响Fig.3-2Effectofpeptideswithdifferentconcentrationoncellsurvivalrate注：与对照组相比，*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001
广东药科大学硕士研究生学位论文18（3）活性多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用MTT检测结果如图3-3显示，当用PP-1多肽预处理细胞24小时后，与MPP+模型组相比，细胞存活率有所增加，当浓度为50、100μM时候，具有统计学意义。而PP-2多肽和PP-3多肽的保护作用没有PP-1明显，因此选择PP-1多肽，浓度为50、100μM进行后续的研究。图3-3多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响Fig.3-3EffectofpeptidesonMPP+-inducedSH-SY5Ycellinjury注：与MPP+模型组相比，*P＜0.05,***P＜0.0013.3.2活性多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响（1）Hoechst33258染色为了检测多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响，采用Hoechst33258荧光染色来观察细胞核形态变化。如图3-4所示，对组照细胞核形态正常，模型组细胞核固缩、呈致密浓染，核碎片增多，而多肽预处理组与模型组相比，荧光强度有所降低，核碎片减少。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多肽类药物的研究进展[J]. 王克全,徐寒梅. 药学进展. 2015(09)
[2]疾病综述:帕金森病[J]. 汤森路透. 国际药学研究杂志. 2015(03)
[3]MPTP损伤的小鼠PD模型的制作与评价[J]. 许耀刚,庞晓峰,汲娟娟. 生物化学与生物物理进展. 2006(10)
博士论文
[1]D-Ala2-GIP-glu-PAL对MPTP诱导的急性和慢性帕金森病小鼠模型的神经保护作用[D]. 李艳伟.山西医科大学 2017
[2]MPP+诱导SH-SY5Y细胞慢性损伤帕金森病模型的建立及鹿茸多肽的保护作用[D]. 新吉乐.吉林大学 2013
[3]治疗肽在抑制ASK1/JNK3信号通路及保护黑质多巴胺能神经元中作用的研究[D]. 李卉.上海交通大学 2012
本文编号：3282848
【文章来源】：广东药科大学广东省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度的MPP+对细胞存活率的影响
广东药科大学硕士研究生学位论文17如图3-1所示，细胞在加入MPP+培养24h后，随着MPP+浓度的增加，细胞存活率明显降低。当MPP+浓度为4mM时，细胞存活率约为50%，故选用此浓度用于后续实验研究。图3-1不同浓度的MPP+对细胞存活率的影响Fig.3-1EffectofMPP+withdifferentconcentrationoncellsurvivalrate注：与对照组相比，*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001（2）活性多肽对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用通过MTT法对三种不同的多肽的细胞毒性作用进行检测，如图3-2所示，不同浓度的多肽对细胞的存活率没有明显的影响，其中PP-2在200μM时，有一定的抑制作用，PP-1和PP-3在浓度为400μM时，有一定的抑制作用。图3-2不同浓度的多肽对细胞存活率的影响Fig.3-2Effectofpeptideswithdifferentconcentrationoncellsurvivalrate注：与对照组相比，*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001
广东药科大学硕士研究生学位论文18（3）活性多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用MTT检测结果如图3-3显示，当用PP-1多肽预处理细胞24小时后，与MPP+模型组相比，细胞存活率有所增加，当浓度为50、100μM时候，具有统计学意义。而PP-2多肽和PP-3多肽的保护作用没有PP-1明显，因此选择PP-1多肽，浓度为50、100μM进行后续的研究。图3-3多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响Fig.3-3EffectofpeptidesonMPP+-inducedSH-SY5Ycellinjury注：与MPP+模型组相比，*P＜0.05,***P＜0.0013.3.2活性多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响（1）Hoechst33258染色为了检测多肽对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响，采用Hoechst33258荧光染色来观察细胞核形态变化。如图3-4所示，对组照细胞核形态正常，模型组细胞核固缩、呈致密浓染，核碎片增多，而多肽预处理组与模型组相比，荧光强度有所降低，核碎片减少。
【参考文献】：
期刊论文
[1]多肽类药物的研究进展[J]. 王克全,徐寒梅. 药学进展. 2015(09)
[2]疾病综述:帕金森病[J]. 汤森路透. 国际药学研究杂志. 2015(03)
[3]MPTP损伤的小鼠PD模型的制作与评价[J]. 许耀刚,庞晓峰,汲娟娟. 生物化学与生物物理进展. 2006(10)
博士论文
[1]D-Ala2-GIP-glu-PAL对MPTP诱导的急性和慢性帕金森病小鼠模型的神经保护作用[D]. 李艳伟.山西医科大学 2017
[2]MPP+诱导SH-SY5Y细胞慢性损伤帕金森病模型的建立及鹿茸多肽的保护作用[D]. 新吉乐.吉林大学 2013
[3]治疗肽在抑制ASK1/JNK3信号通路及保护黑质多巴胺能神经元中作用的研究[D]. 李卉.上海交通大学 2012
本文编号：3282848
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