Let-7d慢病毒载体对体外骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响

发布时间：2017-04-28 05:17

  本文关键词：Let-7d慢病毒载体对体外骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的micro RNAs是一类高度保守的、非编码内源性小RNA分子,对机体正常的生长发育及疾病的发生发展起着重要的作用。Let-7家族成员对骨髓间充质干细胞(MSCs)的分化起着重要的作用,了解微小RNA let-7d对MSCs向神经细胞分化的影响可以促进颅内干细胞移植的发展。本文通过体外构建let-7d慢病毒载体并转染MSCs来探讨let-7d在MSCs向神经细胞分化过程中的作用。方法1构建大鼠慢病毒载体,分别为转染空白慢病毒、转染let-7d目的基因,转染抑制let-7d表达的目的基因,并用这些慢病毒载体转染大鼠MSCs;根据转染的慢病毒载体的不同,实验分为4个组:即转染上调组(转染let-7d-LV)、转染下调组(转染let-7d-inhibition-LV)、阴性对照组(转染空白慢病毒)、未转染组。2 MTT法检测转染后细胞的存活率。3采用法舒地尔诱导转染后的各组MSCs促使其分化为神经细胞,4以免疫细胞化学法检测分化后细胞表面NSE、MAP-2的表达变化,以确定MSCs已分化为神经细胞;5应用RT-PCR、Western bolt法检测分化后神经细胞MAP-2 m RNA的表达量,以确定MSCs分化为神经细胞的效率;结果1在倒置荧光显微镜下观察到转染的MSCs有荧光显示,提示let-7d慢病毒载体转染成功。各组之间细胞的荧光强度无明显差异,提示不同组别之间细胞的转染效率无明显差异。2 MTT法检测细胞存活率,发现转染上调组、转染下调组及阴性转染组的细胞存活率之间无显著差异(P0.05),但此三组细胞存活率均低于未转染组。3在转染后的各组细胞之间加入法舒地尔,发现细胞形态发生变化,免疫细胞化学法发现高表达神经元标志物NSE、MAP-2,表明法舒地尔可以诱导MSCs向神经细胞分化。4免疫细胞化学法发现转染上调组细胞的NSE、MAP-2的荧光强度高于阴性对照组和转染下调组(P0.05),而转染下调组细胞的NSE、MAP-2的荧光强度低于阴性对照组和转染下调组(P0.05)。5 RT-PCR法检测MAP-2 m RNA表达量,发现转染上调组细胞的MAP-2表达量高于阴性对照组和转染下调组(P0.05),而转染下调组细胞的MAP-2表达量低于阴性对照组和转染下调组(P0.05)。结论1 let-7d慢病毒载体可以在体外转染大鼠MSCs,并且可以用于实验研究。2 let-7d可以促进MSCs向神经细胞的分化,通过控制let-7d的表达可以影响MSCs向神经细胞的分化效率。
【关键词】：let-7d 慢病毒载体 MSCs 神经细胞
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文缩略词10-11
• 1 引言11-13
• 2 材料与方法13-18
• 3 结果18-20
• 4 讨论20-24
• 5 结论24-25
• 参考文献25-30
• 附表与图30-36
• 综述 Let-7d的功能及其在神经系统疾病中的作用36-52
• 参考文献46-52
• 个人简历52-53
• 致谢53

【共引文献】

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1 王翠琴;张广宇;彭越;彭涛;贾延R

本文编号：332203