RAGE调控补体C3参与糖尿病脑病的机制研究
发布时间：2021-08-14 17:36
目的:1.观察RAGE与补体C3在糖尿病小鼠海马区的表达水平;2.探究高糖通过RAGE调控补体C3转录及活化的分子机制;3.明确RAGE与补体C3对糖尿病小鼠大脑结构和功能的影响。方法:1.动物实验:（1）C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照组、糖尿病组、糖尿病+FPS-ZM1组、糖尿病+C3aRA组。糖尿病组给予一次性150mg/kg STZ腹腔注射建立1型糖尿病小鼠模型。建模3个月后,FPS-ZM1组及C3aRA组糖尿病小鼠分别给予腹腔注射RAGE特异性抑制剂FPS-ZM1（1mg/kg）以及C3aRA（60mg/kg）,每天注射一次,连续4周。（2）Morris水迷宫检测小鼠的空间学习与记忆力。（3）免疫荧光双标法观察星形胶质细胞标志物GFAP与RAGE,GFAP与补体C3的定位关系,并分析RAGE与补体C3在星形胶质细胞中的表达水平;免疫荧光单标法检测突触素SYP的表达水平。（4）Western blot检测补体C3、RAGE/p38MAPK/NF-κB信号分子的表达以及突触蛋白的表达。（5）Nissl以及TUNEL染色分析神经元数量及凋亡情况。2.细胞实验:（1）原代星形胶...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：91 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RAGE与补体C3在糖尿病小鼠海马组织表达水平上调A．Westernblot检测小鼠海马组织补体C3和RAGE的蛋白表达
图 1.2 糖尿病小鼠海马区补体 C3 与星形胶质细胞共定位免疫荧光标记补体 C3（红光）与星形胶质细胞标记物 GFAP（绿光）。标尺为 50μm。Fig.1.2 Co-localization of C3 and astrocytes in the diabetic hippocampusCo-localization of C3 (red) and astrocytes marker GFAP(green). Scale bar=50μm.2.2.2 高糖培养的原代星形胶质细胞合成分泌补体 C3 的水平我们通过体外提取原代小鼠星形胶质细胞，用 Western blot 以及 ELISA 法进一步明确不同葡萄糖浓度对星形胶质细胞补体 C3 的蛋白合成水平以及分泌水平的影响。我们设有 NG，HG 15mM，HG 30mM 组。为排除渗透压对细胞的影响，设置了渗透压对照组：NG+30mM 甘露醇组，HG15mM+15mM 甘露醇组。Westernblot 结果显示，HG 组（包括 HG15mM 以及 HG30mM）星形胶质细胞的补体 C3蛋白含量较 NG 组增加，结果具有统计学差异（P<0.05，P<0.001）；NG+30mM甘露醇组与 NG 组比较，HG15mM+15mM 甘露醇组与 HG15mM 组比较，补体C3 蛋白水平均无统计学差异（P>0.05）（图 1.3A）。 ELISA 结果显示，HG15mM
图 1.3 高糖培养的原代星形胶质细胞合成分泌补体 C3A．Western blot 检测星形胶质细胞补体 C3 的蛋白表达并进行统计分析。B．ELISA 检测星形胶质细胞分泌补体 C3 含量。* P<0.05；*** P<0.001；n=3。NG 为对照组，HG 为高糖组。C．体外细胞免疫荧光标记补体 C3（绿光）与星形胶质细胞标志物 GFAP（红光）。标尺为50μm。Fig.1.3 Cellular and extracellular C3 protein level in the high glucose induced astrocytes.A, Representative western blot assay of C3 protein expression; B, ELISA assay for astrocytessecreted C3. * P<0.05; ***P<0.001; n=3. C, Immunofluorescence stain for C3 in astrocytes.Scale bar=50μm.3 讨论20 世纪初期，人们开始意识到糖尿病患者常常伴随记忆力的下降。1922 年，Mile 和 Root 观察到糖尿病病人在认知水平测试中表现欠佳[27]。随后多名学者描述了糖尿病引起的中枢神经系统相关并发症：由 Nielsen 等人在尸检过程中观察
本文编号：3342894
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：91 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
RAGE与补体C3在糖尿病小鼠海马组织表达水平上调A．Westernblot检测小鼠海马组织补体C3和RAGE的蛋白表达
图 1.2 糖尿病小鼠海马区补体 C3 与星形胶质细胞共定位免疫荧光标记补体 C3（红光）与星形胶质细胞标记物 GFAP（绿光）。标尺为 50μm。Fig.1.2 Co-localization of C3 and astrocytes in the diabetic hippocampusCo-localization of C3 (red) and astrocytes marker GFAP(green). Scale bar=50μm.2.2.2 高糖培养的原代星形胶质细胞合成分泌补体 C3 的水平我们通过体外提取原代小鼠星形胶质细胞，用 Western blot 以及 ELISA 法进一步明确不同葡萄糖浓度对星形胶质细胞补体 C3 的蛋白合成水平以及分泌水平的影响。我们设有 NG，HG 15mM，HG 30mM 组。为排除渗透压对细胞的影响，设置了渗透压对照组：NG+30mM 甘露醇组，HG15mM+15mM 甘露醇组。Westernblot 结果显示，HG 组（包括 HG15mM 以及 HG30mM）星形胶质细胞的补体 C3蛋白含量较 NG 组增加，结果具有统计学差异（P<0.05，P<0.001）；NG+30mM甘露醇组与 NG 组比较，HG15mM+15mM 甘露醇组与 HG15mM 组比较，补体C3 蛋白水平均无统计学差异（P>0.05）（图 1.3A）。 ELISA 结果显示，HG15mM
图 1.3 高糖培养的原代星形胶质细胞合成分泌补体 C3A．Western blot 检测星形胶质细胞补体 C3 的蛋白表达并进行统计分析。B．ELISA 检测星形胶质细胞分泌补体 C3 含量。* P<0.05；*** P<0.001；n=3。NG 为对照组，HG 为高糖组。C．体外细胞免疫荧光标记补体 C3（绿光）与星形胶质细胞标志物 GFAP（红光）。标尺为50μm。Fig.1.3 Cellular and extracellular C3 protein level in the high glucose induced astrocytes.A, Representative western blot assay of C3 protein expression; B, ELISA assay for astrocytessecreted C3. * P<0.05; ***P<0.001; n=3. C, Immunofluorescence stain for C3 in astrocytes.Scale bar=50μm.3 讨论20 世纪初期，人们开始意识到糖尿病患者常常伴随记忆力的下降。1922 年，Mile 和 Root 观察到糖尿病病人在认知水平测试中表现欠佳[27]。随后多名学者描述了糖尿病引起的中枢神经系统相关并发症：由 Nielsen 等人在尸检过程中观察
本文编号：3342894
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3342894.html
最近更新
教材专著
