SSB、RecG和RecO蛋白在DNA损伤修复中作用关系的研究
本文关键词：SSB、RecG和RecO蛋白在DNA损伤修复中作用关系的研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：脊髓小脑共济失调病症与三核苷酸重复序列(CAG)n(CTG)n不稳定性扩增有关,其不稳定性的分子机制尚不清楚,但已经知道,细胞内多种基因对(CAG)n(CTG)n重复序列不稳定性都有一定的影响。本论文通过构建ssb-113、recG、recO相关基因缺陷菌株,以分析在DNA复制、重组和损伤修复中SSB、RecG和RecO蛋白发挥的重要作用,从而为研究大肠杆菌体内ssb、recG、recO基因对(CAG)n(CTG)n重复序列不稳定性的影响奠定基础。本文首先利用P1噬菌体的普遍转导原理成功构建ssb-113、recG、recO相关基因缺陷的菌株。紫外线辐射结果表明,不同基因型菌株的存活率不同。recG依赖和recO依赖的DNA复制过程中的紫外线辐射损伤的修复在SSB功能正常的细胞内能力基本相当。而recG和recO在ssb-113细胞内分别作用于两条与紫外线辐射修复有关的途径中,这两条途径分别是:复制叉回转和同源重组修复,结合实验室前期的结论,RecO优先于Rec G与DNA单链结合蛋白SSB的C-末端作用可以引导紫外线损伤修复过程中使用recO依赖(RecO-dependent)紫外线损伤修复机制。此外,同时缺失ssb-113recGrecO的细胞的紫外线敏感性与ssb+recGrecO相当,表明recGrecO双基因缺陷之后的细胞对紫外线辐射的修复能力与DNA单链结合蛋白的作用关系不明显。羟基脲实验结果表明,加入羟基脲使DNA复制叉停滞是由于DNA复制底物缺失,并没有造成DNA的实质损伤,因此RecG和RecO蛋白在此过程中作用不明显,而ssb-113菌株对羟基脲更敏感。因此,处于DNA复制过程中的紫外线损伤需要RecG或RecO依赖的修复机制才能被有效加以修复,UvrABC机制不能有效修复DNA复制过程中的紫外线损伤;RecG依赖的修复和RecO依赖的修复受SSB功能的调节;上述发现只适用于紫外线辐射损伤过程,不适用于羟基脲诱导的DNA单链空缺的修复。
【关键词】：三核苷酸重复序列 单链DNA结合蛋白 RecG蛋白 RecO蛋白 紫外线辐射损伤
【学位授予单位】：北京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R744.7
【目录】：
- 摘要5-6
- Abstract6-11
- 第1章 绪论11-19
- 1.1 本论文研究的目的和意义11
- 1.2 国内外研究现状及发展趋势11-17
- 1.2.1 与CAG重复序列异常扩增有关的脊髓小脑共济失调及研究现状11-13
- 1.2.2 DNA复制、重组和损伤修复中相关蛋白的功能13-17
- 1.3 研究方案17-19
- 1.3.1 菌株构建17-18
- 1.3.2 不同基因缺陷型菌株的表征18
- 1.3.3 (CAG)n(CTG)n重复序列在不同基因型菌株模型中复制的探索18-19
- 第2章 几种基因缺陷型菌株的构建19-31
- 2.1 引言19-20
- 2.2 实验材料20-23
- 2.2.1 菌种及来源20
- 2.2.2 实验仪器20-21
- 2.2.3 实验试剂与耗材21
- 2.2.4 培养基及抗生素配制21-22
- 2.2.5 实验用药物及溶液的配制22-23
- 2.3 实验方法23-26
- 2.3.1 P1噬菌体的活化23-24
- 2.3.2 制备不同菌株的P1噬菌体裂解液24-25
- 2.3.3 不同基因缺陷型菌株的构建与验证25-26
- 2.4 结果与讨论26-30
- 2.4.1 P1噬菌体的活化26
- 2.4.2 菌株构建与验证26-30
- 2.5 本章小结30-31
- 第3章 不同基因缺陷型菌株的表征31-64
- 3.1 引言31-32
- 3.1.1 不同基因缺陷型菌株的生长曲线测定31
- 3.1.2 紫外线辐射对不同基因缺陷型菌株的影响31-32
- 3.1.3 羟基脲对不同基因缺陷型菌株生长的影响32
- 3.2 实验材料32-33
- 3.2.1 菌株及其来源32-33
- 3.2.2 实验仪器33
- 3.2.4 实验试剂及耗材33
- 3.2.5 培养基及抗生素配制33
- 3.2.6 实验用药物与溶液的配制33
- 3.3 实验方法33-37
- 3.3.1 不同基因缺陷型菌株生长曲线的测定33-34
- 3.3.2 紫外线辐射对不同基因缺陷型菌株的影响34-35
- 3.3.3 羟基脲对不同基因缺陷型菌株生长的影响35-37
- 3.4 实验结果与分析37-62
- 3.4.1 不同基因缺陷型菌株生长曲线的测定37-38
- 3.4.2 紫外线辐射对不同基因缺陷型菌株生长的影响38-47
- 3.4.3 羟基脲对不同基因缺陷型菌株生长的影响47-62
- 3.5 本章小结62-64
- 第4章 (CAG)n(CTG)n在不同基因缺陷型菌株中复制的探索64-73
- 4.1 引言64
- 4.2 实验材料64-65
- 4.2.1 菌株和质粒及其来源64
- 4.2.2 实验仪器64-65
- 4.2.3 实验试剂及耗材65
- 4.2.4 培养基及抗生素配制65
- 4.2.5 实验用药物与溶液的配制65
- 4.3 实验方法65-68
- 4.3.1 质粒的提取及重复数的确定65-66
- 4.3.2 质粒的转化66-68
- 4.4 实验结果与分析68-72
- 4.4.1 提取质粒之后(CAG)n(CTG)n重复数的确定68-69
- 4.4.2 质粒的转化结果69-72
- 4.5 本章小结72-73
- 结论73-75
- 参考文献75-81
- 攻读学位期间发表论文与研究成果清单81-82
- 致谢82
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本文关键词：SSB、RecG和RecO蛋白在DNA损伤修复中作用关系的研究，由笔耕文化传播整理发布。
本文编号：335680
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