微囊化嗅鞘细胞移植对P2X4受体介导神经病理痛的作用研究

发布时间：2017-04-30 04:05

  本文关键词：微囊化嗅鞘细胞移植对P2X4受体介导神经病理痛的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨微囊化嗅鞘细胞移植治疗神经病理性疼痛对P2X4受体在背根神经节表达的影响及作用。方法:⒈将一只SD大鼠处死,取其嗅球,用NASH差速贴壁法培养嗅鞘细胞,并做嗅鞘细胞形态及纯度鉴定;⒉制作微囊化嗅鞘细胞(microencapsulated olfactory ensheathing cells.MC-OECs);⒊将96只雌雄不拘健康的SD大鼠,随机分为4组(每组24只):即假手术组(sham组)、坐骨神经损伤模型组(CCI组)、嗅鞘细胞移植组(OECs组)及微囊化嗅鞘细胞移植组(MC-OECs组):将OECs及微囊化OECs移植到损伤坐骨神经周围;4.术后7、14d用行为学方法测定大鼠机械缩足反射阈值,运用RT-PCR、免疫组织化学染色及蛋白印迹技术检测L4-5处背根神经节P2X4受体的表达水平情况。结果:术后7、14d,(1)采用行为学方法检测大鼠机械缩足反射阈值:与sham组对比,CCI组大鼠机械缩足反射阈值明显减低;与CCI组对比,OECs组与MC-OECs组大鼠机械缩足反射阈值明显增加;与OECs组对比,MC-OECs组大鼠机械缩足反射阈值稍增加。(2)L4-5处背根神经节P2X4受体RT-PCR m RNA表达水平:CCI组与sham组相比,m RNA表达量明显增加;而与CCI组对比,嗅鞘细胞组及微囊化嗅鞘细胞组表达水平明显减低。(3)免疫组织化学染色:与sham组对比,CCI组L4-5背根神经节阳性细胞P2X4受体阳性细胞平均吸光度明显增加,而与CCI组对比,OECs组及MC-OECs组则明显减低。(4)蛋白印迹:与sham组对比,CCI组P2X4受体蛋白表达明显增加;而与CCI组对比,OECs组及MC-OECs组则明显减低。与OECs组对比,MC-OECs组在L4-5背根神经节P2X4受体m RNA、阳性细胞平均吸光度及蛋白表达水平稍低于OECs组。结论:嗅鞘细胞及微囊化嗅鞘细胞移植能减轻坐骨神经损伤后引起的神经病理性疼痛,可能是通过降低L4-5处背根神经节P2X4受体的表达水平,而且微囊化嗅鞘细胞组治疗效果优于嗅鞘细胞移植组。
【关键词】：微囊化 嗅鞘细胞 背根神经节 神经病理性疼痛 P2X4受体
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料与方法14-28
• 2.1 实验材料14-19
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 实验主要试剂14-15
• 2.1.3 主要仪器15-16
• 2.1.4 主要试剂及培养液16-19
• 2.2 实验方法19-28
• 2.2.1 动物模型建立19-20
• 2.2.2 嗅鞘细胞的取材及培养20
• 2.2.3 嗅鞘细胞的鉴定20-21
• 2.2.4 微囊化嗅鞘细胞的制作21
• 2.2.5 大鼠机械缩足反射阈值检测21
• 2.2.6 免疫组化染色检测21-22
• 2.2.7 RT-PCR检测22-25
• 2.2.8 蛋白印迹(Western Blot)25-27
• 2.2.9 统计学分析27-28
• 第3章 结果28-34
• 3.1 嗅鞘细胞培养情况及免疫荧光染色结果28-29
• 3.2 大鼠机械缩足反射阈值测量结果29-30
• 3.3 RT-PCR结果30-31
• 3.4 蛋白印迹结果31-32
• 3.5 免疫组化染色结果32-34
• 第4章 讨论34-37
• 4.1 嗅鞘细胞的来源及培养34-35
• 4.2 OECs移植对疼痛相关P2X4受体的影响35
• 4.3 微囊化OECs移植对神经病理性疼痛相关P2X4受体影响作用35-37
• 第5章 结论与展望37-38
• 5.1 结论37
• 5.2 展望37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 攻读学位期间的研究成果43-44
• 综述 移植嗅鞘细胞修复神经损伤作用的研究进展44-50
• 参考文献49-50

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