慢病毒介导的PARP-1 siRNA对脑梗死后神经血管单元的调控

发布时间：2017-04-30 07:03

  本文关键词：慢病毒介导的PARP-1 siRNA对脑梗死后神经血管单元的调控，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景缺血性脑血管病作为当今世界影响健康的主要危险因素,并且当今的溶栓治疗效果并不理想。缺血后脑组织损伤机制复杂繁多,脑缺血不仅导致神经元受损,而且还损伤胶质细胞、血管以及细胞外基质,即神经血管单元各个成分均受累。研究显示：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[PARP-1]是脑缺血后脑组织损伤的重要调控因子,脑缺血后过度激活的PARP-1可以诱导神经血管单元中各成分的损伤。研究目的观察慢病毒介导的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1) RNA干扰对大鼠脑梗死后神经血管单元的影响。研究方法1.细胞培养及转染神经元取自24h SD大鼠乳鼠,随机分为正常对照组(CON), Control siRNA组(CON, LV-control-siRNA), siRNA1, siRNA2以及siRNA3组,rtPCR检测各组PARP-1的表达,以选择有效的siRNA。2.动物实验SD大鼠152只,随机分为假手术组、梗死组、Control siRNA组(侧脑室注射空病毒)和LV-PARP1-siRNA组(侧脑室注射LV-PARP1-siRNA),每组又分6个亚组。另外18只SD大鼠用于检测大鼠LV-PARP1-siRNA的转染效率,18只大鼠用于western blotting实验以检测脑梗死后PARP-1的活性。3.神经功能评分评价各组大鼠神经功能缺损情况。4.TTC染色评估脑梗死体积。5.伊文思蓝EB通透率及脑组织干湿重测量评价血脑屏障通透性改变。6.HE染色观察脑梗死区的病理变化。7.电镜观察神经血管单元超微结构。结果1. SiRNA1,siRNA2和siRNA3均可显著抑制PARP-1的表达(p0.01)；2.与假手术组相比,PARP-1酶活性在脑梗死后1h和3h显著升高；3.与空病毒组相比,LV-PARP1-siRNA组PARP-1 mRNA表达水平明显下降(P0.05),且于转染后第5天时,PARP-1 mRNA水平降至最低,之后持续维持此水平；4.与假手术组相比,脑梗死组和Control siRNA组大鼠神经功能评分显著增高(P0.05)；与脑梗死组相比,LV-PARP1-siRNA组大鼠神经功能评分显著降低(P0.05)：5.与脑梗死组和Control siRNA组相比,LV-PARP1-siRNA组大鼠脑梗死体积明显减小(9.875%±0.611%,P0.05);6.与假手术组相比,脑梗死组和Control siRNA组大鼠脑组织中EB和水含量显著增多(P0.05)；与脑梗死组相比,LV-PARP1-siRNA组大鼠脑组织中EB和水含量减少(P0.05)；7.HE染色结果显示：脑梗死组海马神经细胞肿胀、破裂、轮廓模糊,染色较深,而LV-PARP1-siRNA组神经细胞排列整齐,染色均匀；8.电镜可见梗死组神经细胞变性,线粒体肿胀、嵴减少,髓鞘变薄、分层,血管内皮细胞凋亡、基底膜不连续,突触数量减少、结构破坏,而LV-PARP1-siRNA组海马神经血管单元超微结构损伤明显减轻。结论抑制PARP-1的表达,可明显减轻脑梗死后神经血管单元的损伤,缩小脑梗死体积,改善神经功能。
【关键词】：PARP-1 RNA干扰 脑梗死 神经血管单元 超微结构
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符号说明12-14
• 研究背景14-16
• 材料与方法16-28
• 结果28-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 附图表36-44
• 参考文献44-49
• 综述49-58
• 参考文献54-58
• 致谢58-59
• 攻读学位期间发表的学术论文及参与课题59-60
• 附件60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 钱敏;郭军;;PARP-1对缺血后神经元修复与损伤机制研究[J];中风与神经疾病杂志;2009年06期

2 张可辉;张亮仁;张礼和;;PARP-1抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展[J];中国药学杂志;2010年22期

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本文编号：336438