SYK调控缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元凋亡及其机制
发布时间：2021-08-28 04:18
目的探讨抑制脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,SYK）对缺氧/缺糖损伤诱导的大脑皮质神经元的凋亡的影响及相关机制。方法分离培养10只SD怀孕大鼠（190230 g,胎龄16 d）胎鼠的大脑皮质神经元细胞并用MAP2免疫荧光法进行鉴定。建立缺氧/缺糖损伤的体外模型,caspase-3荧光检测试剂盒检测caspase-3活性,Annexin-V FITC/PI法检测细胞凋亡,q RT-PCR检测SYK和凋亡相关的原癌基因Fra-1 m RNA的表达,Western Blot检测SYK、Bcl-2和Fra-1蛋白的表达。Control组:无转染处理的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK siRNA组:转染SYK siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;SYK-Fra-1 siRNA组:同时转染SYK siRNA和Fra-1 siRNA的缺氧/缺糖损伤的神经元;non-specific siRNA组:转染non-specific siRNA的氧/缺糖损伤的神经元。结果 MAP2免疫荧光鉴定为神经元细胞。缺氧/缺糖损伤诱导神经元SYK表达（P<0.01...
【文章来源】：第三军医大学学报. 2017,39(13)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
缺氧/缺糖损伤皮质神经元中SYK的蛋白电泳图
:正常细胞组;2:anoxia/hypoglycemia组图1缺氧/缺糖损伤皮质神经元中SYK的蛋白电泳图2．3抑制细胞中SYK的表达利用细胞转染技术抑制经缺氧/缺糖处理的神经元细胞的SYK表达量，为了检验转染效率，我们检测了SYKmRNA和蛋白表达情况。结果显示，SYKsiRNA组mRNA表达量(1．27±0．34)相对无转染处理组(2.82±0．27)和转染non-specificsiRNA的细胞组(2.95±0．79)明显下调(P＜0．05)，SYKsiRNA组SYK蛋白表达量(1．27±0．34)相对无转染处理组(2.54±0．56)和转染non-specificsiRNA的细胞组(2.83±0．71)明显下调(P＜0．05)(图2)。1:无转染处理;2:转染SYKsiRNA的细胞;3:转染non-spe-cificsiRNA的细胞图2转染后神经元中SYK的蛋白电泳图2．4抑制SYK表达降低缺氧/缺糖损伤诱导的皮质神经元细胞的凋亡为了检测抑制SYK对缺氧/缺糖损伤诱导的皮质神经元细胞凋亡的影响，我们采用了caspase-3活性检测和Annexin-VFITC/PI方法测定细胞凋亡情况。结果显示，SYKsiRNA组中caspase-3活性(0．16±0．04)较无转染处理组(0．42±0．02)和转染non-specificsiRNA的细胞组(0．46±0．11)显著降低(P＜0．01)。SYKsiRNA组细胞凋亡率(20．00±5．57)%较无转染处理组(51．00±3．90)%和转染non-specificsiRNA的细胞组(57．70±8．08)%显著降低(P＜0．05)(图3)。http://aammt．tmmu．edu．cn第三军医大学学报，2017，39(13)1383
1:Control;2:SYKsiRNA组;3:non-specificsiRNA图3细胞流式检测抑制SYK对神经元凋亡的影响2．5抑制SYK表达使Fra-1表达量上调为了探究抑制SYK对皮质神经元缺氧/缺糖损伤起保护作用的可能机制，我们检测了SYK受到抑制后经缺氧/缺糖处理的神经元细胞中Fra-1的表达情况。结果显示，与对照组(0．93±0．11)和non-specificsiRNA组(1．18±0．41)相比，SYKsiRNA组(2．79±0．37)中Fra-1mRNA表达量明显上调(P＜0．01);与对照组(1．03±0．05)和non-specificsiRNA组(1．27±0．49)相比，SYKsiRNA组(2．49±0．42)Fra-1蛋白表达量也明显上调(P＜0．05)(图4)。1:Control;2:SYKsiRNA组;3:non-specificsiRNA组图4WesternBlot检测抑制SYK对Fra-1表达量的影响2．6同时抑制SYK和Fra-1促进缺氧/缺糖对皮质神经元细胞的损伤为了进一步探究可能的机制，我们利用细胞转染技术同时抑制SYK和Fra-1的表达量，为了检测转染效率，我们检测了SYK和Fra-1的蛋白表达量。结果显示，SYK-Fra-1-siRNA组中SYK和Fra-1的蛋白表达量较non-specificsiRNA组中均显著下降(图5)。然后，我们将两者表达量同时收到抑制的细胞进行缺氧/缺糖处理，检测caspase-3活性和Bcl-2蛋白表达量。结果显示SYK-Fra-1-siRNA组中caspase-3活性(0.530±0.045)相对于SYKsiRNA组(0．240±0．085)显著上升(P＜0．01)，与non-specificsiRNA组(0．590±0.003)接近。SYK-Fra-1-siRNA组中Bcl-2蛋白表达量(1．31±0．25)相对于SYKsiRNA组(4．47±0．43)显著下降(P＜0．01)，与non-specificsiRNA组(1．68±0．07)接近(图6)。1:non-specificsiRNA组;2:SYKsiRNA组;3:SYK-Fra-1-siRNA组A:同时抑制SYK和Fra-1后两者的蛋白电泳图;B:同时抑制SYK和Fra-1后两者的蛋白变化量(n=3，x珋±s);SYK-Fra-1-s
本文编号：3367775
【文章来源】：第三军医大学学报. 2017,39(13)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
缺氧/缺糖损伤皮质神经元中SYK的蛋白电泳图
:正常细胞组;2:anoxia/hypoglycemia组图1缺氧/缺糖损伤皮质神经元中SYK的蛋白电泳图2．3抑制细胞中SYK的表达利用细胞转染技术抑制经缺氧/缺糖处理的神经元细胞的SYK表达量，为了检验转染效率，我们检测了SYKmRNA和蛋白表达情况。结果显示，SYKsiRNA组mRNA表达量(1．27±0．34)相对无转染处理组(2.82±0．27)和转染non-specificsiRNA的细胞组(2.95±0．79)明显下调(P＜0．05)，SYKsiRNA组SYK蛋白表达量(1．27±0．34)相对无转染处理组(2.54±0．56)和转染non-specificsiRNA的细胞组(2.83±0．71)明显下调(P＜0．05)(图2)。1:无转染处理;2:转染SYKsiRNA的细胞;3:转染non-spe-cificsiRNA的细胞图2转染后神经元中SYK的蛋白电泳图2．4抑制SYK表达降低缺氧/缺糖损伤诱导的皮质神经元细胞的凋亡为了检测抑制SYK对缺氧/缺糖损伤诱导的皮质神经元细胞凋亡的影响，我们采用了caspase-3活性检测和Annexin-VFITC/PI方法测定细胞凋亡情况。结果显示，SYKsiRNA组中caspase-3活性(0．16±0．04)较无转染处理组(0．42±0．02)和转染non-specificsiRNA的细胞组(0．46±0．11)显著降低(P＜0．01)。SYKsiRNA组细胞凋亡率(20．00±5．57)%较无转染处理组(51．00±3．90)%和转染non-specificsiRNA的细胞组(57．70±8．08)%显著降低(P＜0．05)(图3)。http://aammt．tmmu．edu．cn第三军医大学学报，2017，39(13)1383
1:Control;2:SYKsiRNA组;3:non-specificsiRNA图3细胞流式检测抑制SYK对神经元凋亡的影响2．5抑制SYK表达使Fra-1表达量上调为了探究抑制SYK对皮质神经元缺氧/缺糖损伤起保护作用的可能机制，我们检测了SYK受到抑制后经缺氧/缺糖处理的神经元细胞中Fra-1的表达情况。结果显示，与对照组(0．93±0．11)和non-specificsiRNA组(1．18±0．41)相比，SYKsiRNA组(2．79±0．37)中Fra-1mRNA表达量明显上调(P＜0．01);与对照组(1．03±0．05)和non-specificsiRNA组(1．27±0．49)相比，SYKsiRNA组(2．49±0．42)Fra-1蛋白表达量也明显上调(P＜0．05)(图4)。1:Control;2:SYKsiRNA组;3:non-specificsiRNA组图4WesternBlot检测抑制SYK对Fra-1表达量的影响2．6同时抑制SYK和Fra-1促进缺氧/缺糖对皮质神经元细胞的损伤为了进一步探究可能的机制，我们利用细胞转染技术同时抑制SYK和Fra-1的表达量，为了检测转染效率，我们检测了SYK和Fra-1的蛋白表达量。结果显示，SYK-Fra-1-siRNA组中SYK和Fra-1的蛋白表达量较non-specificsiRNA组中均显著下降(图5)。然后，我们将两者表达量同时收到抑制的细胞进行缺氧/缺糖处理，检测caspase-3活性和Bcl-2蛋白表达量。结果显示SYK-Fra-1-siRNA组中caspase-3活性(0.530±0.045)相对于SYKsiRNA组(0．240±0．085)显著上升(P＜0．01)，与non-specificsiRNA组(0．590±0.003)接近。SYK-Fra-1-siRNA组中Bcl-2蛋白表达量(1．31±0．25)相对于SYKsiRNA组(4．47±0．43)显著下降(P＜0．01)，与non-specificsiRNA组(1．68±0．07)接近(图6)。1:non-specificsiRNA组;2:SYKsiRNA组;3:SYK-Fra-1-siRNA组A:同时抑制SYK和Fra-1后两者的蛋白电泳图;B:同时抑制SYK和Fra-1后两者的蛋白变化量(n=3，x珋±s);SYK-Fra-1-s
本文编号：3367775
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