MRI引导聚焦超声联合载基因微泡靶向开放血脑屏障促进外源基因体内转染

发布时间：2021-08-30 19:11

　　第一部分MRI引导聚焦超声靶向可逆开放小鼠BBB目的建立MRI引导超声靶向微泡破裂（ultrasound-targeted microbubbledestruction，UTMD）开放小鼠血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）的模型，并为后续MRI引导UTMD介导基因体内转染筛选出最优的超声参数。方法将15只昆明小鼠随机分成三组，分布接受MRI引导1.1MHz聚焦超声联合微泡以1.1W、2.2W、4.4W不同强度辐照小鼠脑部40s，通过靶点MRI增强扫描、伊文氏蓝（EB）染色和HE组织学检查了解不同超声强度下BBB开放的程度、24h后恢复状态和组织学变化，筛选出对脑组织影响最小的超声参数。结果1．MRI增强扫描图像：在超声辐照结束当时及24h两个时间点对鼠脑行增强扫描，结果显示：声功率1.1W组在两时间点均无增强；2.2W组在超声辐照后靶区当即出现明显的小范围增强，在24h后已未见增强；4.4W组在超声辐照后靶区出现明显的大范围增强，且24h后仍可在该区域见片状增强信号，但范围有所减小。2．EB染色：超声辐照后立即行EB染色，声功率1.1W组靶区脑组织未见蓝染，2.... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

MRI引导UTMD辐照鼠脑示意图

各组的脑组织均只能看到蓝染的细胞功实现外源基因 EGFP 在脑内的表达检测 EGFP 表达部位EGFP 在脑组织内的表达部位，我们采异性标记物 β-Tubulin III 的分布关系共区域化（见附图 5），表明超声联胞浆内表达。测定RNA的OD260／280比值在1.8-2.凝胶电泳结果见28S，18S两条带清晰PCR的要求(见图 2)。

图 3 RT-PCR 检测各组 EGFP mRNA 的含量（A 示根据处理因素的不同分为对照组（Con 组）、质粒组（P 组）、质粒＋微泡组（P+M组）、质粒＋超声组（P+U 组）、质粒＋超声＋微泡组（P+U+M 组），B 为根据观察时间点的不同，分为 0 h/ 6 h/ 12 h/ 24 h/ 48 h/ 5 d/ 7 d/ 14 d/ 28 d 组）Fig.3 Use of Real-time PCR to investigate the changes of EGFP mRNA expression (relative toGAPDH mRNA).(A) EGFP mRNA expression in brain of different treatment groups. Con: control group; P:Plasmid group; P+M: Plasmid + microbubble group; P+U: Plasmid + US group; P+U+M:Plasmid + US + microbubble group. **P < 0.01 compared to Con, P, P+M, P+U group. (B)EGFP mRNA expression in brain of P+U+M group at 0 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 5 d, 7 d, 14 dand 28 d after transfection,**P < 0.01 compared to 0 h, 6 h, 12 h, 24 h, 5 d, 7 d, 14 d and 28 dgroup.（n=5）2.6 Western blot 检测各组 EGFP 蛋白的表达情况

【参考文献】：
期刊论文
[1]MRI引导与监测聚焦超声靶向开放血脑屏障兔脑给药[J]. 梅杰,程远,宋彧,杨延庆,汪峰,王智彪,刘映江.  中国医学影像技术. 2009(02)
[2]MR温度图及信号强度值在超声开放家兔血脑屏障中的作用[J]. 宋彧,程远,杨延庆,梅杰,李发琪,王智彪,刘映江.  激光杂志. 2008(04)
[3]低频超声联合微泡经颅开放血脑屏障初步研究[J]. 程远,于锐,宋彧,马颖,陈维福,王志刚.  中国医学影像技术. 2006(01)



本文编号：3373345