硫化氢供体的表征及其上调Kir6.2、SUR1的表达抑制癫痫的机制研究

发布时间：2021-09-23 13:41

　　目的:首先,观察硫化氢供体的表面体征及吸收光谱,检测硫化氢供体对急性分离海马神经元和人喉癌上皮细胞系Hep-2细胞活性的影响以及光学成像作用;其次,在细胞水平,原代培养海马神经元并鉴定,硫化氢供体与海马神经元共培养,无镁细胞外液处理建立癫痫细胞模型,观察硫化氢供体对海马神经元的细胞活性的影响,检测海马神经元Kir6.2、SUR1 mRNA的表达,深入探讨细胞内硫化氢供体对海马神经元的保护作用及机制;最后,在动物水平,建立动物癫痫模型,侧脑室注射硫化氢供体,观察行为学表现、记录脑电,免疫组化检测Kir6.2在海马及皮层中的表达,检测皮层及海马组织中Kir6.2、SUR1蛋白和mRNA的表达,深入探讨硫化氢供体对癫痫的抑制作用及机制。方法:第一部分:透射电镜下观察硫化氢供体的表征情况,进行硫化氢供体吸收光谱的测定,用CCK-8试剂盒检测硫化氢供体对原代海马神经元和人喉癌上皮细胞系Hep-2的细胞活性的影响,并筛选出硫化氢供体作用的最大安全浓度和作用时间,用激光共聚焦检测硫化氢供体在两种细胞内的吸收以及发光通道情况。第二部分:在细胞水平上,进一步探索硫化氢供体对海马神经元的作用及机制,原代培... 

【文章来源】： 王林杰 广州医科大学

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠脑部立体定位仪

edition》[44]，如图1、图2所示（前囟后0.9 mm，矢状缝旁开1.6 mm，硬脑膜下4.0 mm）的位置定位，钻孔，用微量注射器以2 μL/min的速度行侧脑室注射。硫化氢供体干预组、硫化氢供体空白对照组侧脑室注射硫化氢供体 10 uL。注射完成留针10 mins，再缓慢退出，缝合伤口。图 1 大鼠脑部立体定位仪 图 2 侧脑室微量注射点（箭头所指）

2.10 脑电引导电极的植入定位海马位置（在大脑左侧前囟后 3.8 mm，矢状缝旁 2.5 mm），钻开颅骨并穿过硬脑膜，将不锈钢双极铜芯电极植入硬膜下 3.0 mm（如图 3、图 4 所示）。术后缝合部分皮肤，以活力碘消毒皮肤预防感染，将大鼠置于屏蔽笼内诱导SE模型。引导电极信号通过BL-420生物机能实验系统记录海马脑电变化，观察癫痫持续状态后 1h 内各组大鼠的脑电图的变化。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3405807