BRCA1蛋白在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

发布时间：2021-09-24 23:10

　　[背景和目的]脑缺血再灌注后会释放大量活性氧（ROS）。ROS引起的氧化应激损伤在缺血性脑卒中疾病进展中发挥重要作用。氧化还原失衡与急性缺血性脑卒中临床转归相关,但潜在的机制尚不明确。因此,更好地了解脑缺血再灌注后氧化应激损伤可能为寻找缺血性脑卒中治疗靶点提供线索。乳腺癌易感蛋白1（BRCA1）参与调节氧化应激反应。过表达乳腺癌细胞BRCA1可促进NRF2及启动子区含有抗氧化反应元件的基因,如NQO1、GPX3及SDO1的表达,进而减少细胞内ROS水平。此外,BRCA1可修复ROS引起的DNA损伤病灶。BRCA1在海马区神经元中有表达。BRCA1功能的缺失会导致DNA损伤增多,神经突生长受限及认知功能缺损加重。心肌缺血再灌注后,BRCA1的表达上调。但BRCA1在脑缺血再灌注后早期脑损伤及远期神经功能恢复中的作用如何,目前尚不清楚。本研究旨在探究BRCA1对脑缺血再灌注损伤转归的影响并明确具体的作用机制。[方法]分别建立小鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型及细胞氧糖剥夺再恢复（OGD/R）模型作为体内外缺血性脑卒中研究模型。运用免疫印迹、real-time PCR及免疫荧光技术观察BRC... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．２?ＢＲＣＡ１蛋白结构１１２２１??

结果显示，假手术小鼠脑组织中ＢＲＣＡ１荧光染色信号较弱，可与神经元??标记物ＮｅｕＮ双标，主要分布于细胞质中，未发现其与小胶质细胞标志物丨ｂａｌ??及星型胶质细胞标志物ＧＦＡＰ双标（图２．２）。??＿＿＿＿??Ｉｂａ１?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ???■■■■??ｍｍｍｕ??图２．２假手术小鼠脑组织中ＢＲＣＡ１表达分布。比例尺：??２．４．２?＼ｌＣＡＯ小鼠脑组织中ＢＫＣＡ１细胞定位及表达变化??接着，我们对ＭＣＡＯ小歐脑组织切片进行免疫双染，发现造模后Ｉｄ梗死灶??边缘区，神经元ＢＲＣＡ１染色信号较假手术小鼠明显升高，细胞核及细胞质均有??分布（图２．３Ａ）。ＢＲＣＡＩ可与神经元标志物ＮｅｕＮ双标，未发现其与小胶质细胞??标志物Ｉｂａｌ及星型胶质细胞标志物ＧＦＡＰ双标（图２．３Ｂ），与在假手术小鼠脑组??织中观察的结果一致。ＭＣＡＯ后升高的ＢＲＣＡ１丨？：要分布于梗死灶．边终Ｋ皮？神??经元上，而在纹状体区及海马ＣＡ１区神经元丨：未见明显升高（图２．３Ａ）。免疫??印迹实验（ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ，?ＷＢ）观察ＭＣＡＯ后ＢＲＣＡ１蛋白表达模式，发现梗死??灶边缘区ＢＲＣ’Ａｌ蛋白表达呈先升高后降低趋势

??至基础水平（图２．４Ａ）。而梗死灶核心区ＢＲＣＡ１表达呈…过性升高，再灌注后??２ｈ达高峰（假手术组的１．９５±０．５６倍），再灌注后６ｈ恢复至基础水平（图２．４Ｂ）。??Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ实验证实ＢＲＣＡ１?ｍＲＮＡ表达趋势与蛋白表达模式基本一致（图??２．５Ａ?和?Ｂ）??Ａ?Ｉｐｓｉｌａｔｅｒａｌ?（ｌ／Ｒ?１ｄ）??ＮｅｕＮ?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ??ｍｗａａｍ??■■■■??■■■■??Ｂ?丨?ｂａ１?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?〇?吻??屬■■■??Ｑ?ＧＦＡＰ?ＢＲＣＡ１?ＤＡＰＩ?Ｏｖｅｒｌａｙ??图２．３?ＭＣＡＯ后ＢＲＣＡｌ细胞定位。（Ａ）?ＭＣＡＯ后Ｉｄ，皮层、纹状体及海马ＣＡ１区ＢＲＣＡ１??与ＮｅｕＮ免疫双标染色；（Ｂ）?ＭＣＡＯ后Ｉｄ，皮层区ＢＲＣＡ１与Ｉｂａｌ或ＧＦＡＰ免疫双标染??色。染色标尺：５０Ｍｍ。??４６??


本文编号：3408615