Parkin的亚硝基化修饰对DMT1的调控及其在帕金森病中的作用
发布时间：2021-10-05 07:56
帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种常见的神经系统退行性疾病,主要病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元的丢失,残存神经元内α-突触核蛋白（α-synuclein,α-Syn）聚集形成路易小体,同时伴有铁在黑质的特异性聚积。硝化应激可引发多种蛋白质,如parkin蛋白等,发生亚硝基化（S-nitrosylation,SNO）,参与神经退行性疾病的发生及进展。Parkin是一种E3泛素连接酶,介导了铁转运蛋白二价金属离子转运体1（divalent metal transporter 1,DMT1）的泛素化降解。本课题组在前期研究中发现DMT1蛋白水平的高表达是黑质铁聚集的重要原因之一,但对其调控机制尚不清楚。由于硝化应激是PD中较为常见的病理表现,因此,深入探讨parkin蛋白的亚硝基化修饰对DMT1的调控及其机制,对阐明PD中黑质铁聚集的原因具有重要意义。本研究首先在SH-SY5Y细胞上,观察了给予一氧化氮（nitric oxide,NO）供体亚硝基谷胱甘肽（nitrosoglutathione,GSNO）处理后,细胞NO水平、SNO-parkin和DMT1蛋白表达...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GSNO对过表达parkin的SH-SY5Y细胞DMT1蛋白水平的影响
青岛大学硕士学位论文验。在某些病理状态下体内会产生过量的 NO，引发多种蛋白质巯基发生亚硝基化。由于细胞内 NO 可迅速转化为亚硝酸盐（NO2）和硝酸盐（NO3），因此可用测量亚硝酸盐和硝酸盐的总浓度来计算 NO 水平的产生。如图 3B 所示，parkin-GSNO 组被氧化的 NO（NO2+NO3）水平升高了 46.5%，与 parkin-GSH 组相比，差别具有高度统计学意义（P<0.01。Parkin-MPP+组被氧化的 NO（NO2+NO3）水平升高了 60.2%，与 parkin-NS 组相比，差别具有高度统计学意义（P<0.001）。Parkin-MPP+处理组与parkin-GSNO 处理组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。给予 NOS 抑制剂 L-NNA预处理后，再给予 MPP+处理，被氧化的 NO（NO2+NO3）水平降低了 35.1%，与parkin-MPP+组相比，差别具有高度统计学意义（P<0.001）。以上结果表明，MPP+与 GSNO 处理细胞均可产生硝化应激，可升高被氧化的 NO（NO2+NO3）水平。
图 4 MPP+对过表达 parkin 的 SH-SY5Y 细胞 DMT1 蛋白水平的影响Fig.4 Effect of MPP+on DMT1 levels in parkin-overexpressed SH-SY5Y cellsA. The levels of SNO-parkin and DMT1 were increased in SH-SY5Y cells treated with200 μM MPP+for 24 hrs. L-NNA inhibited the S-nitrosylation of parkin and the increasedDMT1 levels in these cells. B. Statistical analysis of changes in SNO-parkin levels. Datawere presented as the ratio of SNO-parkin/parkin. C. Statistical analysis of changes inDMT1 levels. Data were presented as the ratio of DMT1 to β-actin. D. Cells viabilityfollowing GSNO or MPP+treatment was determined by MTT assay. All data werepresented as mean ±SEM of 6 independent experiments.***P<0.001, compared with theparkin-GSH group;^^P<0.01,^^^P<0.001, compared with the parkin-NS group;##P<0.01,###P<0.001, compared with the parkin-MPP+groups. N= 3.5. Parkin 的亚硝基化修饰可增强 SH-SY5Y 细胞的摄铁能力我们进一步观察了 SH-SY5Y 细胞中 parkin 发生亚硝基化修饰对铁摄取功能的影响。如图 5 所示，parkin-GSNO 组和 parkin-MPP+组的荧光强度显著降低，与对照
本文编号：3419317
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GSNO对过表达parkin的SH-SY5Y细胞DMT1蛋白水平的影响
青岛大学硕士学位论文验。在某些病理状态下体内会产生过量的 NO，引发多种蛋白质巯基发生亚硝基化。由于细胞内 NO 可迅速转化为亚硝酸盐（NO2）和硝酸盐（NO3），因此可用测量亚硝酸盐和硝酸盐的总浓度来计算 NO 水平的产生。如图 3B 所示，parkin-GSNO 组被氧化的 NO（NO2+NO3）水平升高了 46.5%，与 parkin-GSH 组相比，差别具有高度统计学意义（P<0.01。Parkin-MPP+组被氧化的 NO（NO2+NO3）水平升高了 60.2%，与 parkin-NS 组相比，差别具有高度统计学意义（P<0.001）。Parkin-MPP+处理组与parkin-GSNO 处理组相比，差异无统计学意义（P>0.05）。给予 NOS 抑制剂 L-NNA预处理后，再给予 MPP+处理，被氧化的 NO（NO2+NO3）水平降低了 35.1%，与parkin-MPP+组相比，差别具有高度统计学意义（P<0.001）。以上结果表明，MPP+与 GSNO 处理细胞均可产生硝化应激，可升高被氧化的 NO（NO2+NO3）水平。
图 4 MPP+对过表达 parkin 的 SH-SY5Y 细胞 DMT1 蛋白水平的影响Fig.4 Effect of MPP+on DMT1 levels in parkin-overexpressed SH-SY5Y cellsA. The levels of SNO-parkin and DMT1 were increased in SH-SY5Y cells treated with200 μM MPP+for 24 hrs. L-NNA inhibited the S-nitrosylation of parkin and the increasedDMT1 levels in these cells. B. Statistical analysis of changes in SNO-parkin levels. Datawere presented as the ratio of SNO-parkin/parkin. C. Statistical analysis of changes inDMT1 levels. Data were presented as the ratio of DMT1 to β-actin. D. Cells viabilityfollowing GSNO or MPP+treatment was determined by MTT assay. All data werepresented as mean ±SEM of 6 independent experiments.***P<0.001, compared with theparkin-GSH group;^^P<0.01,^^^P<0.001, compared with the parkin-NS group;##P<0.01,###P<0.001, compared with the parkin-MPP+groups. N= 3.5. Parkin 的亚硝基化修饰可增强 SH-SY5Y 细胞的摄铁能力我们进一步观察了 SH-SY5Y 细胞中 parkin 发生亚硝基化修饰对铁摄取功能的影响。如图 5 所示，parkin-GSNO 组和 parkin-MPP+组的荧光强度显著降低，与对照
本文编号：3419317
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