UBQLN2促进脊髓侧索硬化症C9ORF72相关蛋白poly（GA）的清除

发布时间：2021-10-21 22:37

　　蛋白聚集体的积累是许多神经退行性疾病的典型特征。C9ORF72基因第一个内含子中六个核苷酸重复序列GGGGCC（G4C2）的扩增是肌萎缩侧索硬化症（Amyotrophiclateralsclerosis,ALS）和额颞叶痴呆（Frontotemporal dementia,FTD）的最常见原因。携带（G4C2）重复扩增的转录物经非ATG依赖性翻译,产生神经毒性二肽重复蛋白（Dipeptide repeat（DPR）:GR,GA,GP,PR,PA）并促成 ALS/FTD的发生。但是目前C9orf72-ALS/FTD的疾病外显率并非100%,提示还有其他机制共同调节其发病。Ubiquilin2（UBQLN2）是另一种ALS致病基因,我们发现UBQLN2与GA蛋白聚集体共定位并相互作用,并且UBQLN2对于GA蛋白聚集体的清除是充分必要的。UBQLN2识别UBR5介导的GA蛋白聚集体泛素化并通过蛋白酶体和自噬系统清除它。UBQLN2的ALS/FTD病理突变部分丧失了对GA蛋白聚集体清除的能力。重要的是,外源表达UBQLN2促进了 GA蛋白聚集体的降解,并部分拯救了 GA诱导的神经元变性和AL... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３．１?ＵＢＱＬＮ２蛋白对ＧＡ聚集体的清除是必须的??２９??

３．３?ＵＢＱＬＮ２病理性突变影响ＧＡ蛋白的清理??突变能导致ＡＬＳ／ＦＴＤ神经退行性疾病的发生，并且这段序列在不同物??种中保持着高度保守的同源性（图３Ａ）。为了更好地了解突变是否会影响??其促进ＧＡ蛋白聚集体清理的功能，我们对？７ＳｇＺ＾２的ＰＸＸ区的５个病理性突变位??点进一步分析。首先，我们构建了不同突变位点的ＵＢＱＬＮ２－Ｆｌａｇ质粒，然后将其与??３２??

ＧＦＰ－ＧＡ蛋白聚集体的清理功能，而Ｐ４９７Ｓ，Ｐ５０９Ｓ这两个位点突变几乎不受影响。??有文献报道ＵＢＱＬＮ２Ｐ５０６Ｔ突变影响了其与ＨＳＰ７０结合，导致功能丧失［２８］。我们??通过免疫共沉淀（Ｃｏ－ＩＰ）的方法对着几个位点也进行了验证（图３Ｄ）。从图中我们??可以看到Ｐ４８７丨，Ｐ５０６Ｔ，?Ｐ５２５Ｓ位点突变的ＵＢＱＬＮ２蛋白与ＨＳＰ７０结合能力显著减??弱，而Ｐ４９７Ｓ，Ｐ５０９Ｓ这两个位点突变的ＵＢＱＬＮ２蛋白与ＨＳＰ７０的结合能力没有明??显变化。我们可以得出结论：ＵＢＱＬＮ２需要在ＨＳＰ７０的协同作用下，才能将泛素化??的ＧＦＰ－ＧＡ蛋白聚集体运输到蛋白酶体或自噬系统进行降解，Ｐ４８７丨，Ｐ５０６Ｔ，?Ｐ５２５Ｓ??位点突变减弱了?ＵＢＱＬＮ２蛋白与ＨＳＰ７０的结合能力，导致ＵＢＱＬＮ２蛋白的功能缺失。??Ａ?Ｂ。必＃?分步??Ｐｒｏｔｅａｓｏｍ＾?ＨＳＦ７０?ＵｂｌｑｕＩＵｎ??ｔ＞｜ｎｄｌｎ＜ａ＿??血ｄｊｎＳＬ??ｂｌｎｊ！ｎｇ＿?？?？?ｉｎｓＧＡ??ｙ－?ｐｓｏｃｓｎ－??＼??Ｔ４？７Ｉ?Ｐ？７ＵＨ？?ＰＭ８８?ｐｓｚｓＢ?、、?ＵＢＱ２－Ｆｌａｇ??■ｏｕｓｅ?ＡＰＣＷＫＶＬ?Ｔ?ｌＩＴＰＶＣＰＶ?Ｉ?［ＣＰＩＣＰＩ?ｆ?－?ｆ?ＣＰＩＣＰＩＣＰＴＧＰＡ?Ｓ?ＣＳＴＣＴＣＩＰＰ?＾??ｒｅｉ?ＴＰＣＷＶＧＶＬ?Ｔ?ｉｉｒＦＡＪＰＶ?Ｉ?１ＧＰ


本文编号：3449849