钠盐对鸡胱抑素淀粉样突变体I66Q聚集特性影响的研究

发布时间：2021-10-26 03:35

　　人胱抑素C（HCC）在体液中的可溶-聚集状态变化与多种脑血管病及阿尔茨海默病密切相关,其原因主要由于其第68位亮氨酸残基突变为谷氨酸后形成L68Q突变体的成淀粉样纤维的能力增强有直接关系。由于在人体内HCC处于与多种离子共存的状态。研究不同的盐离子对胱抑素聚集的影响将为研究HCC聚集特性及其在体内聚集部位和引发聚集的特定条件提供必要的信息及相关线索。由于鸡胱抑素（chicken cystatin,cC）单体比较稳定,在结构上与HCC有较高的相似性,并且其突变体I66Q与HCC突变体L68Q相对应,所以本文采用cC突变体I66Q为模型进行研究。本研究通过在cC突变体I66Q的毕赤酵母液体培养基中添加不同的钠盐离子,应用SDS-PAGE及蛋白质免疫印迹方法,研究了不同盐下胱抑素I66Q突变体聚集情况。并结合分子动力学进行有关分子机制的探讨。本研究发现,在所选 NaCl、NaBr、NaF、NaI、NaH₂PO₄、NaNO₃、CH₃COONa七种钠盐中,在0.1M浓度下除了 NaF、CH₃

【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１毕赤酵母在含有不同浓度磷酸二氢钠ＹＰＤ丰富培养基中的生Ｌ＜：曲线（Ａ）及诱导培??

Ｔｉｍｅ（ｈ）??（Ｂ）??图２－１毕赤酵母在含有不同浓度磷酸二氢钠ＹＰＤ丰富培养基中的生Ｌ＜：曲线（Ａ）及诱导培??养基中具体生长情况（Ｂ）??表２－３?ＹＰＭ培养基在培养前后ｐＨ值的变化情况??条?培养基?＋?ＮａＨ２Ｐ〇４?（ｍｏｌ／Ｌ）??牛????ｐＨ?０?０．０５?０．１?０．２?０．３?０．４?０．５??培养基（前，ＹＰＭ）?５．４９?５．２１?５．０１?４．８８?４．７５?４．６３?４．５６??培养基（后，ＹＰＭ）?４．４６?４．４９?４．５１?４．２５?４．７２?４．６１?４．５４??２．?４?２不同浓度ＮａＨ２Ｐ０４下胞外胱抑素聚集情况??为确定ＮａＨ２Ｐ０４对鸡胱抑素聚集情况影响是否为浓度相关，我们通过在诱??导培养基中加入浓度梯度为〇．〇５?Ｍ，?０．１?Ｍ，０．２?Ｍ，０．３?Ｍ，?０．４?Ｍ，０．５?Ｍ的??ＮａＨ２Ｐ０４，诱导表达三天后，比较胱抑素单倍体、寡聚体和多聚体及不溶物变化??情况。由图三可以看出，随着浓度的增高，多聚体及不溶物图２－２?（Ａ）与对照??组相比并无明显差异；寡聚体图２－２?（Ｂ）则随着ＮａＨ２Ｐ０４浓度的增高而增高，??并且是依赖于ＮａＨ２Ｐ０４浓度的增高而增多；而单倍体图２－２（Ｃ）则随着ＮａＨ２Ｐ０４??２４??

０．０５Ｍ?ＤＩＭ?０２Ｍ?０．３Ｍ?０．４Ｍ?０．５Ｍ??（Ｄ）??图２－２不同浓度ＮａＨ２Ｐ０４对胞外胱抑素聚集的影响。??（Ａ）?１０％盐析为不溶物及多聚体部分；（Ｂ）?４５％盐析寡聚体部分；（Ｃ）?６０％盐析为单体??部分；（Ｄ）量化的柱状图：泳道１：对照；泳道２－７分别为：０．０５Ｍ、０．１Ｍ、０．２Ｍ、０．３Ｍ、??０．４Ｍ、０．５ＭＮａＨ２ＰＯ４终浓度的样品。??２．?４．３不同浓度ＮａＨ２Ｐ０４存在的培养基中毕赤酵母胞内胱抑素聚集情况??由于ＮａＨ２Ｐ０４在溶液中为可溶离子，可以自由扩散和协助扩散进入酵母细??胞，为了去除ＮａＨ２Ｐ０４对胞内蛋白质合成与分泌的影响，我们进一步研究胞内??胱抑素单倍体和二倍体含量随着ＮａＨ２Ｐ０４浓度升高的变化情况。应用蛋白质免??２６??

【参考文献】：
期刊论文
[1]二硫键和巯基在蛋白质结构功能中的作用及分析方法[J]. 田悦,杜军保.  实用儿科临床杂志. 2007(19)



本文编号：3458746