脂肪干细胞体外定向分化为神经元样细胞及其对铁超载的原代皮层神经元保护作用的研究
发布时间：2021-10-27 12:29
第一部分大鼠脂肪干细胞与原代皮层神经元分离、培养与鉴定【背景】脂肪干细胞是来源于脂肪组织的成体间充质干细胞的一种,在多种神经疾病,如退行性变、炎性脱髓鞘、卒中等动物疾病模型中发挥了重要的治疗及神经保护作用。因此本研究旨在探索脂肪干细胞参与神经修复的能力及机制。【目的】体外分离、培养稳定传代的脂肪干细胞和成熟的原代皮层神经元细胞。【方法】脂肪干细胞取材于4-6周龄,体重160 g雌性SD大鼠,大鼠腹股沟区的脂肪组织在无菌条件下取出,切碎,I胶原酶在中消化45分钟,等体积完全培养基终止消化,离心后接种于完全培养基中,3天换液一次,7-8天后根据生长情况予以传代处理。原代大鼠皮层神经元取材于胎龄16-17天的SD胎鼠,剥去脑膜,皮层切碎,胰蛋白酶消化消化15分钟,三倍体积的完全培养基终止消化,巴氏吸管吹打,细胞接种于多聚赖氨酸包被的培养皿中,4小时后更换为神经元培养基,3天半量换液一次。【结果】体外培养的脂肪干细胞呈纺锤形,贴壁生长,ADSCs高表达CD44（86.69%）和CD29（98.49%）,而不表达造血干细胞标志物CD45、极低表达内皮细胞标志物CD34（8.61%）。体外分离培养...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【图文】：
不同时期体外培养的脂肪干细胞形态特征
图 2 稳定传代的 P3 代脂肪干细胞流式细胞学鉴定（A）不同表面抗体在 P3 代脂肪干细胞流式鉴定结果；（B）稳定传代的 P3 代脂肪干细胞高表达间充质干细胞的表面标记物 CD29、CD44，低表达造血干细胞的表面标记物 CD34、CD45；2. 体外培养 11 天的大鼠皮层神经元形态及鉴定我们对培养 11 天左右的神经元进行免疫荧光鉴定。如图 3 所示，体外培养 11天的神经元胞体圆且小，突触丰富，细胞间相互连接成网。 MAP2 是成熟神经元特异性的标志物，神经元胞体和神经突触被染色呈红色荧光， 胞核呈蓝色。共制作细胞爬片 6 张，每张取 4 个视野，计数 MAP2 阳性细胞数。各爬片阳性率见表 1，阳性率为 96.17±1.62%，细胞纯度可用于进行后续实验。
华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文表 1 不同细胞爬片神经元 MAP2 阳性细胞率视野 1 视野 2 视野 3 视野 4 平均阳性率（%）爬片 1 46/49 51/53 49/52 47/4995.0633±1.0226爬片 2 45/47 52/55 50/53 46/4895.1158±0.6779爬片 3 47/51 46/47 45/46 55/5796.0866±2.3357爬片 4 44/45 55/57 39/41 42/4396.7663±1.0756爬片 5 39/40 55/57 48/49 40/4296.7971±1.0451爬片 6 37/39 46/47 50/51 52/5397.2241±1.3609x±SD（%）96.1755±1.6293
【参考文献】：
期刊论文
[1]Adult neural stem cell dysfunction in the subventricular zone of the lateral ventricle leads to diabetic olfactory defects[J]. Yu-hong Jing,Chu-chu Qi,Li Yuan,Xiang-wen Liu,Li-ping Gao,Jie Yin. Neural Regeneration Research. 2017(07)
[2]脂肪来源成体干细胞分化为内皮细胞的潜能[J]. 曹莹,孟艳,孙昭,廖联明,韩钦,李静,刘艳宁,赵春华. 中国医学科学院学报. 2005(06)
本文编号：3461605
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【图文】：
不同时期体外培养的脂肪干细胞形态特征
图 2 稳定传代的 P3 代脂肪干细胞流式细胞学鉴定（A）不同表面抗体在 P3 代脂肪干细胞流式鉴定结果；（B）稳定传代的 P3 代脂肪干细胞高表达间充质干细胞的表面标记物 CD29、CD44，低表达造血干细胞的表面标记物 CD34、CD45；2. 体外培养 11 天的大鼠皮层神经元形态及鉴定我们对培养 11 天左右的神经元进行免疫荧光鉴定。如图 3 所示，体外培养 11天的神经元胞体圆且小，突触丰富，细胞间相互连接成网。 MAP2 是成熟神经元特异性的标志物，神经元胞体和神经突触被染色呈红色荧光， 胞核呈蓝色。共制作细胞爬片 6 张，每张取 4 个视野，计数 MAP2 阳性细胞数。各爬片阳性率见表 1，阳性率为 96.17±1.62%，细胞纯度可用于进行后续实验。
华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文表 1 不同细胞爬片神经元 MAP2 阳性细胞率视野 1 视野 2 视野 3 视野 4 平均阳性率（%）爬片 1 46/49 51/53 49/52 47/4995.0633±1.0226爬片 2 45/47 52/55 50/53 46/4895.1158±0.6779爬片 3 47/51 46/47 45/46 55/5796.0866±2.3357爬片 4 44/45 55/57 39/41 42/4396.7663±1.0756爬片 5 39/40 55/57 48/49 40/4296.7971±1.0451爬片 6 37/39 46/47 50/51 52/5397.2241±1.3609x±SD（%）96.1755±1.6293
【参考文献】：
期刊论文
[1]Adult neural stem cell dysfunction in the subventricular zone of the lateral ventricle leads to diabetic olfactory defects[J]. Yu-hong Jing,Chu-chu Qi,Li Yuan,Xiang-wen Liu,Li-ping Gao,Jie Yin. Neural Regeneration Research. 2017(07)
[2]脂肪来源成体干细胞分化为内皮细胞的潜能[J]. 曹莹,孟艳,孙昭,廖联明,韩钦,李静,刘艳宁,赵春华. 中国医学科学院学报. 2005(06)
本文编号：3461605
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