小鼠嗅球注射α-synuclein阳性包涵体形成并沿神经轴突播散的机制研究

发布时间：2021-11-08 17:44

　　背景帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种常见的神经退行性疾病,也是最常见的突触核蛋白病之一,众所周知帕金森病典型的病理表现为脑中黑质多巴胺神经元退行性变和路易小体沉积;α-突触核蛋白是多巴胺能神经元中嗜伊红染色路易小体（Lewy body,LB）的主要成分^[1];路易小体内有多种蛋白质富集,主要包括α-突触核蛋白、parkin、泛素等,其中α-突触核蛋白是其主要成分。神经元中α-突触核蛋白阳性包涵体是其主要的病理改变,即由错误折叠的α-突触核蛋白（alpha-synuclein,α-syn）构成的异常细胞质内含物^[2];主要累及黑质纹状体多巴胺能神经元,还包括去甲肾上腺素能神经及脑干、5-HT神经元。α-突触核蛋白是可溶性的蛋白质,当与膜结合时,结构发生α-螺旋化的改变。在病理条件下,它会寡聚化聚集成纤维体,排列成富含β-片层结构的薄片^[1,3,4]。Braak^[5]等发现在帕金森病患者不同病程的发生发展阶段,错误折叠异常聚集的α-突触核蛋白在神经系统内通过轴突按照一定顺序... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

制备α-突触核蛋白单体、寡聚体、纤维体的形态示意图

图 2A 小鼠嗅球立体定位注射图 2 B 小鼠头部解剖示意图及连接嗅球（OB）的各个脑区OB：嗅球；AON：前嗅核；FrA：额叶联络皮质；OTu：嗅结节；Str：丘脑上辐射 PIR：梨形皮质；Am：丘脑前内侧核；LEnt：内嗅区外侧皮质2.6 小鼠灌注取材在不同时间点（注射后1天、2天、3天及4天）灌注小鼠。我们用戊巴比妥钠麻醉小鼠并用0.9％盐水经心脏灌注，然后用磷酸盐中的4％PFA缓冲。 我们收集小鼠大脑（每组4-5只小鼠）用于组织学实验取材，在4％PFA中将它们固定24小时，并将它们置于30％蔗糖磷酸盐缓冲液中。 我们将大脑储存在4°C直到切片。我们在冷冻切片机上将每只小鼠的整个大脑切成30μm自由浮动的冠状切片，并将它们储存在4℃的防冻液中直至进行免疫组织化学染色及免疫荧光染色。2.7 免疫组化法检测嗅球 α-突触核蛋白阳性包涵体的表达

图 2A 小鼠嗅球立体定位注射图 2 B 小鼠头部解剖示意图及连接嗅球（OB）的各个脑区OB：嗅球；AON：前嗅核；FrA：额叶联络皮质；OTu：嗅结节；Str：丘脑上辐射 PIR：梨形皮质；Am：丘脑前内侧核；LEnt：内嗅区外侧皮质2.6 小鼠灌注取材在不同时间点（注射后1天、2天、3天及4天）灌注小鼠。我们用戊巴比妥钠麻醉小鼠并用0.9％盐水经心脏灌注，然后用磷酸盐中的4％PFA缓冲。 我们收集小鼠大脑（每组4-5只小鼠）用于组织学实验取材，在4％PFA中将它们固定24小时，并将它们置于30％蔗糖磷酸盐缓冲液中。 我们将大脑储存在4°C直到切片。我们在冷冻切片机上将每只小鼠的整个大脑切成30μm自由浮动的冠状切片，并将它们储存在4℃的防冻液中直至进行免疫组织化学染色及免疫荧光染色。2.7 免疫组化法检测嗅球 α-突触核蛋白阳性包涵体的表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]α-突触核蛋白在神经损伤中的作用[J]. 贾琳琳,李术.  畜牧与兽医. 2011(02)
[2]α-突触核蛋白的生物学功能及其在帕金森病中的作用[J]. 熊中奎,胡雅儿.  中国病理生理杂志. 2010(09)
[3]α-synuclein表达与相关神经系统疾病的关系[J]. 宋香全,康云霄,李双成.  河北医科大学学报. 2010 (03)
[4]α-突触核蛋白存在于大鼠脑线粒体中[J]. 刘光伟,殷娟娟,张春岩,李昕,刘耀波,李尧华,杨慧,陈彪,于顺.  首都医科大学学报. 2007(03)
[5]SH-SY5Y细胞α-突触核蛋白的过表达可部分抵抗鱼藤酮诱导的氧化应激[J]. 刘延英,赵焕英,赵春礼,段春礼,鲁玲玲,杨慧.  生理学报. 2006(05)



本文编号：3483941