脑缺血再灌注时claudin-5和occludin表达变化及明胶酶对其影响的实验研究

发布时间：2021-11-26 18:35

　　本研究旨在观察脑缺血再灌注时claudin-5和occludin表达变化及明胶酶（MMP-2和-9）对其影响，并探讨其可能的作用机制。首先，通过大鼠大脑中动脉闭塞（2h）再灌注模型，选取脑缺血再灌注后的4个再灌注时间点进行研究，即再灌注15min，再灌注3h，再灌注6h，再灌注22h。对大鼠缺血侧纹状体组织，通过伊文思蓝染料渗出，量化血脑屏障的通透性；通过Western blot测定claudin-5，occludin蛋白的表达变化；通过透射电子显微镜观察神经血管单元/紧密连接的形态结构；通过原位酶谱法，在大鼠脑冠状切片图上，勾画与这4个再灌注时间点相关的MMPs活化的解剖学分布；并使用TTC染色法，在脑组织切片上同线粒体能量代谢障碍的区域相对比。其次，在上述研究的基础上，进一步选取再灌注3h和再灌注24h这两个再灌注时间点进行研究。通过伊文思蓝染料，测定缺血侧，非缺血侧纹状体组织血脑屏障通透性；通过明胶酶谱法，确定MMPs的活性来源；通过实时定量PCR，Western blot测定claudin-5，occludin在缺血侧，非缺血侧mRNA变化及其蛋白水平；由于紧密连接蛋白和星形胶... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：134 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
内容提要
中文摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 综述
    2.1 MMPs 与缺血性脑卒中
        2.1.1 MMPs 概况
        2.1.2 MMPs 多相作用
        2.1.3 生物标志物 MMPs
        2.1.4 靶向 MMPs
    2.2 NVU/TJ 与缺血性脑卒中
        2.2.1 NVU 功能解剖
        2.2.2 ECs 结合部
        2.2.3 TJ 调控途径
第3章 实验方法
    3.1 实验动物与模型制备
        3.1.1 实验动物来源
        3.1.2 大鼠 MCAO 模型的制备
        3.1.3 动物分组及药物干预
        3.1.4 脑组织取材
    3.2 伊文思蓝 BBB 通透性测定
        3.2.1 主要仪器与试剂
        3.2.2 操作方法与步骤
    3.3 Western blot
        3.3.1 主要仪器与试剂
        3.3.2 操作方法与步骤
    3.4 透射电镜
        3.4.1 主要仪器与试剂
        3.4.2 操作方法与步骤
    3.5 荧光原位明胶酶谱
        3.5.1 实验原理
        3.5.2 主要仪器与试剂
        3.5.3 操作方法与步骤
    3.6 TTC 染色法
        3.6.1 实验原理
        3.6.2 主要仪器与试剂
        3.6.3 操作方法与步骤
    3.7 明胶酶谱法
        3.7.1 主要仪器与试剂
        3.7.2 操作方法与步骤
    3.8 实时定量 PCR
        3.8.1 主要仪器与试剂
        3.8.2 操作方法与步骤
        3.8.3 实验结果
    3.9 免疫荧光双染
        3.9.1 主要仪器与试剂
        3.9.2 操作方法与步骤
    3.10 统计分析
第4章 结果
    4.1 BBB，TJPs，MMPs 变化
        4.1.1 BBB 通透性变化
        4.1.2 claudin-5 蛋白表达变化
        4.1.3 occludin 蛋白表达变化
        4.1.4 NVU/TJ 超微形态结构
        4.1.5 脑梗死体积演变
        4.1.6 MMPs 活化分布
    4.2 MMPs 与 BBB 通透性
        4.2.1 MMPs 与 EB 渗出
        4.2.2 MMP-2，MMP-9 活性变化
        4.2.3 MMP-2，MMP-9 mRNA 表达变化
    4.3 MMPs 抑制剂对 TJPs 影响
        4.3.1 MMPs 抑制剂对 BBB 通透性影响
        4.3.2 claudin-5，occludin mRNA 表达变化
        4.3.3 MMPs 抑制剂对 claudin-5 蛋白降解影响
        4.3.4 MMPs 抑制剂对 occludin 蛋白降解影响
    4.4 免疫荧光双重染色
        4.4.1 再灌注早期免疫荧光双重染色
        4.4.2 再灌注晚期免疫荧光双重染色
第5章 讨论
    5.1 TJPs 表达变化与 MMPs 活化相关
        5.1.1 BBB 通透性变化
        5.1.2 TJPs 与 BBB 通透性
        5.1.3 MMPs 与 BBB 通透性
    5.2 MMP-2 与 TJ 屏障损伤启动相关
        5.2.1 MMP-2 表达及作用
        5.2.2 MMP-2 活化特性
        5.2.3 MMP-2 细胞来源
        5.2.4 其他因素对 MMPs 影响
    5.3 MMPs 抑制剂抑制 TJPs 降解
        5.3.1 MMPs 抑制剂降低 BBB 通透性
        5.3.2 claudin-5，occludin 不同变化
        5.3.3 MMPs 抑制剂使用可行性
    5.4 MMP-9 参与延迟阶段 TJ 屏障破坏
    5.5 MMPs 影响 TJPs 机制探讨
第6章 结论
参考文献
作者简介及在读期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3520706