脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经在大鼠坐骨神经缺损修复中的作用
发布时间：2021-12-11 06:18
周围神经损伤是临床外科常见的疾病之一,其治疗及功能恢复长期以来都是临床医生面临的一项重要挑战。目前临床上自体神经移植是周围神经缺损修复的“金标准”,但由于其存在来源受限、牺牲供区次要神经功能等因素其临床应用受到限制,因此人工神经为临床修复提供了一个新思路,成为目前周围神经损伤修复的研究热点。近年来随着组织工程技术的发展,众多的材料被应用于人工神经的制备。蚕丝具有高韧性以及良好的生物相容性,是一种常见的组织工程材料。本课题组前期研究表明利用蚕丝纤维构建的微通道人工神经导管在引导和促进再生神经纤维的生长方面有显著的效果,但是其在体内却难以降解;在随后的研究中发现,在炎症反应中的细胞吞噬作用是其在体内降解的主要因素之一,同时在神经损伤修复早期,适度的炎症反应也有助于促进损伤神经的修复。研究表明,当周围神经组织损伤后,炎症反应随即被触发,损伤处以及远端全长神经纤维发生瓦勒氏变性（Wallerian degeneration,WD）,在此过程中,巨噬细胞吞噬变性的组织碎片,为神经再生扫除障碍,雪旺氏细胞增殖活化形成Büngner带,并且分泌神经营养因子,促进轴突的再生。脂多糖（lipopolys...
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS对各组大鼠血细胞的影响
第3章脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的制备与手术移植23其自然回缩后切除神经形成10mm缺损。取各组人工神经导管，以LPS组人工神经为例（图3.1），套接于神经的断端，8/0无创缝合线于神经外膜与人工神经管壁缝合。最后用2/0缝合线依次将肌肉、皮肤缝合，伤口处注射1mL双抗以防感染。假手术组则只切开皮肤、钝性分离肌肉组织暴露出坐骨神经后不做任何处理，然后依次将肌肉、皮肤缝合。自体移植组则将切除的10mm坐骨神经重新缝合。术后每组动物做好标记，分笼喂养。图3.1人工神经导管移植示意图Figure3.1Schematicdiagramofartificialnerveconduitgraft3.2.6统计学分析采用SPSS22.0软件进行统计分析，所有数据结果均以平均值±标准差表示，多组间结果比较采用单因素方差分析，利用Duncan法进行多重比较，同一时间点上标不同字母表示差异显著（P<0.05），同一时间点上标相同字母表示差异不显著（P>0.05），用Origin9.0进行作图。3.3结果与讨论3.3.1脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的形态如图3.2所示，为了构建人工神经内芯层，对蚕丝纤维进行一系列的处理。将生丝进行横向冰冻切片，结果显示，本研究所用生丝由丝胶（SE）和其包裹的单丝（SF）组成，平均每根生丝含18根单丝，单丝横截面多呈三角形（图3.2A），平均宽度为13μm。扫描电镜下观察生丝的结构，清晰可见每根单丝表面均附着大量丝胶蛋白（图3.2B）；利用碳酸氢钠溶液脱丝胶后，单丝表面的丝胶蛋白全部被去除，即得不含丝胶蛋白的熟丝丝束（图3.2C）；图3.1D显示，载LPS的海藻酸钙凝胶均匀附着于每根单丝表面；图3.2E显示，PLA膜具有多孔结构，其覆盖在载LPS的海藻酸钙凝胶熟丝丝束表面，一定程度上减缓了LPS的释放速率。图3.3显示，人工神经导管长12mm，内径约1.8mm，管壁厚?
西南大学硕士学位论文24图3.2蚕丝纤维的处理A.生丝横截面冰冻切片；B.生丝表面结构（SEM）；C.熟丝表面结构（SEM）D.载LPS海藻酸钙熟丝表面结构；E.PLA膜覆盖载LPS海藻酸钙熟丝表面结构；SF，单丝；SE，丝胶；CA，海藻酸钙Figure3.2TreatmentofsilkfibersA.Frozensectionofrawsilkcrosssection;B.Rawsilksurfacestructure(SEM);C.Thesurfacestructureofsilkfibers(SEM)D.SurfacestructureofLPS-loadedcalciumalginatesilkfibers;Surfacestructure;SF,monofilament;SE,sericin;CA,calciumalginate图3.3LPS/蚕丝纤维/PLA复合人工神经形态A.外部形态；B.横截面；C.外表面（SEM）；D.内部微通道横截面（SEM）Figure3.3LPS/silkfiber/PLAcompositeartificialnervemorphologyA.Externalmorphology;B.Crosssection;C.Externalsurface(SEM);D.Internalmicrochannelcrosssection(SEM)3.3.2雪旺氏细胞的培养与鉴定细胞在原代培养的第3天，逐渐地从组织块中脱离出来，开始贴壁增殖，并向周围迁移生长。到第8天时，已有大量增殖、贴壁的细胞，细胞形状大多呈长
【参考文献】：
期刊论文
[1]TNF-α及其受体与乳腺癌的研究进展[J]. 张华,许凤燕. 现代免疫学. 2019(03)
[2]Comparison of morphological and functional outcomes of mouse sciatic nerve repair with three biodegradable polymer conduits containing poly （lactic acid）[J]. Fernanda Marques Pestana,Rui C.C.Domingues,Júlia Teixeira Oliveira,Daniela F.P.A.Dur?o,Camila Oliveira Goulart,Henrique Rocha Mendon?a,Anne Caroline Rodrigues dos Santos,Natália Tavares de Campos,Beatriz Theodoro da Silva,Cristina Cardoso Pereira,Cristiano Piacsek Borges,Ana Maria Blanco Martinez. Neural Regeneration Research. 2018(10)
[3]蚕丝在生物医用材料领域的应用研究[J]. 马艳,李智,冉瑞龙,李康. 材料导报. 2018(01)
[4]脂多糖干预对大鼠周围神经损伤后瓦勒变性的影响[J]. 熊乐,张倩,沈若武,边洪琳,孙广强,王毅,张凤玉,张蓓. 中国实验动物学报. 2017(02)
[5]周围神经损伤修复方法的研究进展[J]. 汤佳,谢松林. 岭南现代临床外科. 2015(06)
[6]蚕丝丝素材料的生物降解性能[J]. 李明忠,张剑,邱玉华,卢神州. 中国材料进展. 2015(Z1)
[7]周围神经导管研究与进展[J]. 罗丽花,周毅. 现代医药卫生. 2015(04)
[8]人羊膜促进大鼠损伤腓总神经功能恢复[J]. 杨进,范振海,惠学玲,冯国纹,张小雨,万卫红,余丽梅. 中国伤残医学. 2013(07)
[9]神经导管生物材料的研究与进展[J]. 高振,王华,罗晓婷. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(31)
[10]LPS所介导的信号转导通路研究进展[J]. 杨一新,李桂源. 中南大学学报(医学版). 2006(01)
本文编号：3534163
【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS对各组大鼠血细胞的影响
第3章脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的制备与手术移植23其自然回缩后切除神经形成10mm缺损。取各组人工神经导管，以LPS组人工神经为例（图3.1），套接于神经的断端，8/0无创缝合线于神经外膜与人工神经管壁缝合。最后用2/0缝合线依次将肌肉、皮肤缝合，伤口处注射1mL双抗以防感染。假手术组则只切开皮肤、钝性分离肌肉组织暴露出坐骨神经后不做任何处理，然后依次将肌肉、皮肤缝合。自体移植组则将切除的10mm坐骨神经重新缝合。术后每组动物做好标记，分笼喂养。图3.1人工神经导管移植示意图Figure3.1Schematicdiagramofartificialnerveconduitgraft3.2.6统计学分析采用SPSS22.0软件进行统计分析，所有数据结果均以平均值±标准差表示，多组间结果比较采用单因素方差分析，利用Duncan法进行多重比较，同一时间点上标不同字母表示差异显著（P<0.05），同一时间点上标相同字母表示差异不显著（P>0.05），用Origin9.0进行作图。3.3结果与讨论3.3.1脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的形态如图3.2所示，为了构建人工神经内芯层，对蚕丝纤维进行一系列的处理。将生丝进行横向冰冻切片，结果显示，本研究所用生丝由丝胶（SE）和其包裹的单丝（SF）组成，平均每根生丝含18根单丝，单丝横截面多呈三角形（图3.2A），平均宽度为13μm。扫描电镜下观察生丝的结构，清晰可见每根单丝表面均附着大量丝胶蛋白（图3.2B）；利用碳酸氢钠溶液脱丝胶后，单丝表面的丝胶蛋白全部被去除，即得不含丝胶蛋白的熟丝丝束（图3.2C）；图3.1D显示，载LPS的海藻酸钙凝胶均匀附着于每根单丝表面；图3.2E显示，PLA膜具有多孔结构，其覆盖在载LPS的海藻酸钙凝胶熟丝丝束表面，一定程度上减缓了LPS的释放速率。图3.3显示，人工神经导管长12mm，内径约1.8mm，管壁厚?
西南大学硕士学位论文24图3.2蚕丝纤维的处理A.生丝横截面冰冻切片；B.生丝表面结构（SEM）；C.熟丝表面结构（SEM）D.载LPS海藻酸钙熟丝表面结构；E.PLA膜覆盖载LPS海藻酸钙熟丝表面结构；SF，单丝；SE，丝胶；CA，海藻酸钙Figure3.2TreatmentofsilkfibersA.Frozensectionofrawsilkcrosssection;B.Rawsilksurfacestructure(SEM);C.Thesurfacestructureofsilkfibers(SEM)D.SurfacestructureofLPS-loadedcalciumalginatesilkfibers;Surfacestructure;SF,monofilament;SE,sericin;CA,calciumalginate图3.3LPS/蚕丝纤维/PLA复合人工神经形态A.外部形态；B.横截面；C.外表面（SEM）；D.内部微通道横截面（SEM）Figure3.3LPS/silkfiber/PLAcompositeartificialnervemorphologyA.Externalmorphology;B.Crosssection;C.Externalsurface(SEM);D.Internalmicrochannelcrosssection(SEM)3.3.2雪旺氏细胞的培养与鉴定细胞在原代培养的第3天，逐渐地从组织块中脱离出来，开始贴壁增殖，并向周围迁移生长。到第8天时，已有大量增殖、贴壁的细胞，细胞形状大多呈长
【参考文献】：
期刊论文
[1]TNF-α及其受体与乳腺癌的研究进展[J]. 张华,许凤燕. 现代免疫学. 2019(03)
[2]Comparison of morphological and functional outcomes of mouse sciatic nerve repair with three biodegradable polymer conduits containing poly （lactic acid）[J]. Fernanda Marques Pestana,Rui C.C.Domingues,Júlia Teixeira Oliveira,Daniela F.P.A.Dur?o,Camila Oliveira Goulart,Henrique Rocha Mendon?a,Anne Caroline Rodrigues dos Santos,Natália Tavares de Campos,Beatriz Theodoro da Silva,Cristina Cardoso Pereira,Cristiano Piacsek Borges,Ana Maria Blanco Martinez. Neural Regeneration Research. 2018(10)
[3]蚕丝在生物医用材料领域的应用研究[J]. 马艳,李智,冉瑞龙,李康. 材料导报. 2018(01)
[4]脂多糖干预对大鼠周围神经损伤后瓦勒变性的影响[J]. 熊乐,张倩,沈若武,边洪琳,孙广强,王毅,张凤玉,张蓓. 中国实验动物学报. 2017(02)
[5]周围神经损伤修复方法的研究进展[J]. 汤佳,谢松林. 岭南现代临床外科. 2015(06)
[6]蚕丝丝素材料的生物降解性能[J]. 李明忠,张剑,邱玉华,卢神州. 中国材料进展. 2015(Z1)
[7]周围神经导管研究与进展[J]. 罗丽花,周毅. 现代医药卫生. 2015(04)
[8]人羊膜促进大鼠损伤腓总神经功能恢复[J]. 杨进,范振海,惠学玲,冯国纹,张小雨,万卫红,余丽梅. 中国伤残医学. 2013(07)
[9]神经导管生物材料的研究与进展[J]. 高振,王华,罗晓婷. 中国组织工程研究与临床康复. 2007(31)
[10]LPS所介导的信号转导通路研究进展[J]. 杨一新,李桂源. 中南大学学报(医学版). 2006(01)
本文编号：3534163
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