脑缺血再灌注损伤诱导的过氧化还原酶6（Prdx6）表达及其与炎性因子关系的研究

发布时间：2022-01-02 13:11

　　过氧化还原酶6（Peroxiredoxin-6）是过氧化物还原酶家族的一员,它是一个具有双重酶活性的蛋白,既具有磷脂酶A2的活性,又具有过氧化物还原酶活性。有多篇文献证实Prdx6在多种疾病中起重要作用,如帕金森病、雅各病、匹克病、肺恶性间皮细胞瘤等。然而,Prdx6在中风中的作用尚未得到很好的研究。在本研究中,通过建立SD大鼠大脑中动脉闭塞模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法（2,3,5-Triphenyte-trazoliumchloride）和苏木精—伊红染色法（HE）鉴定脑缺血模型是否成功。免疫组织化学法（Immunohistochemistry）观察Prdx6在大脑中不同脑区的表达情况,蛋白质印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（RTPCR）检测大脑不同脑区中Prdx6的蛋白和基因表达水平。免疫荧光双标法观察Prdx6在神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞中的表达情况。RT-PCR检测MCAO鼠不同脑区炎症因子（i NOS、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10）的m RNA水平以及与Prdx6表达的相关性。目的:1、观察MCAO鼠脑中Prdx6表达;2... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英文缩略词表(Abbreviation)
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 实验材料
    2.1 实验动物
    2.2 抗体
    2.3 主要试剂和试剂盒
    2.4 引物
    2.5 主要仪器与设备
    2.6 主要试剂和溶液的配方
3 实验方法
    3.1 SD大鼠大脑中动脉闭塞模型建立
        3.1.1 SD大鼠来源
        3.1.2 大脑中动脉闭塞模型(MCAO)
        3.1.3 分离大鼠大脑组织
    3.2 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法
    3.3 石蜡切片
        3.3.1 组织固定
        3.3.2 组织脱水、透明
        3.3.3 组织浸蜡与包埋
        3.3.4 组织切片
    3.4 苏木素-伊红染色(HE)
    3.5 免疫组织化学染色(IHC)
    3.6 免疫荧光双标染色(IF)
    3.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
        3.7.1 引物设计与合成
        3.7.2 RNA提取
        3.7.3 RT反应
        3.7.4 q-PCR扩增
    3.8 蛋白质免疫印迹(WB)
        3.8.1 蛋白样品制备
        3.8.2 SDS-PAGE凝胶制备
        3.8.3 上样电泳
        3.8.4 转膜
        3.8.5 IB检测
    3.9 统计分析
4 结果
    4.1 大鼠MCAO模型造模成功
        4.1.1 使用TTC染色法证明大鼠MCAO造模成功
        4.1.2 HE染色法观察大鼠脑缺血性损伤
    4.2 MCAO引起大鼠脑组织中星形胶质细胞数量增加
    4.3 局灶性脑缺血增加脑中小胶质细胞数量
    4.4 局灶性脑缺血导致大鼠大脑皮质中神经元的丢失
    4.5 局灶性脑缺血上调大脑皮质中Prdx6表达
        4.5.1 WB方法检测Prdx6在大脑皮质的表达
        4.5.2 IHC方法检测Prdx6在不同脑区的表达
    4.6 缺血再灌注诱导Prdx6在星形胶质细胞中表达
    4.7 缺血再灌注诱导Prdx6在神经元中的表达
    4.8 Prdx6不在小胶质细胞中表达
    4.9 缺血再灌注诱导的Prdx6表达与炎症因子水平的相关性
5 讨论
6 结论
7 本研究的创新点
8 参考文献
附录
    个人简历
    在读期间的研究成果
致谢
综述
    参考文献



本文编号：3564235