脊髓M1/M2小胶质细胞极化参与SNI大鼠神经病理性疼痛的实验研究
发布时间：2022-01-04 17:11
目的:研究脊髓M1/M2小胶质细胞极化是否参与大鼠SNI外周神经损伤所致神经病理性疼痛以及相关调控机制,从而进一步探讨神经炎症对神经病理性疼痛的作用及其作用机制,为治疗神经病理性疼痛提供理论依据。方法:将大鼠随机分为空白组（Blank组）、假手术组（Sham组）、SNI模型组（SNI组）。构建大鼠SNI坐骨神经分支选择性损伤神经病理性疼痛模型,在造模成功后1d、3d、7d、14d、21d,运用Von Frey纤维丝测试仪检测大鼠机械痛域的改变;运用免疫荧光及Western blot观察SNI模型神经病理性疼痛大鼠脊髓背角小胶质细胞活化聚集情况;运用免疫荧光观察SNI模型神经病理性疼痛大鼠脊髓背角M1、M2型小胶质细胞两种极化状态表达情况;运用Western blot检测神经病理性疼痛大鼠脊髓中促炎因子（TNF-α、IL-1β）以及抗炎因子（IL-10）表达水平。结果:大鼠SNI神经病理性疼痛模型建造成功。大鼠机械痛域检测结果显示:与sham组相比,SNI组大鼠术后1d、3d、7d、14d、21d机械痛阈降低（P<0.05）。其中,大鼠SNI术后14d痛域降至最低;大鼠SNI神经损...
【文章来源】：济宁医学院山东省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠SNI神经病理性疼痛模型建造
图 2：大鼠机械痛域测定印迹 （Western Blotting）检测各时相点测定 MWT 后处死大鼠，快速分离 织匀浆后，采用 BCA 法进行蛋白定量, 测定经聚丙烯酰胺凝胶电泳，转至聚偏二氟乙烯清白蛋白室温封闭 2h，加入一抗（Arg-1: 1:50Abcam、CD206: 1:500，Abcam、IBA-1: 1:80Abcam、TNF-a: 1:300，Abcam、IL-4: 1:300bcam），4℃孵育过夜，1×TBST 洗涤三次，每酶标二抗（1：1000）室温孵育 1 h, TBST
图 3：大鼠多聚甲醛灌注取材 (immunofluorescence, IF) 染色ham 组和 SNI14d 组大鼠脊髓冰冻切片中随机染色。冰冻切片置于室温干燥, PBS (0.01M, 10 min，冷却至室温,依次加入含有 0.3％T清室温封闭 1h；加入一抗（CD86, 1:500,AbcIba-1, 1:100,Abcam）,4℃孵育过夜；PBS 洗(Alexa Fluor 488，1：1000，Abcam )室温孵，每次 10 min；含有 DAPI 的抗荧光衰减剂(Zeiss,德国)观察。每张脊髓切片任选5个不重
【参考文献】：
期刊论文
[1]传统观念的转变:极化的小胶质细胞/巨噬细胞在中枢神经系统修复中的双重作用[J]. 杨俭,冉媛媛,张妍,杜会山,刘宗建,吉训明,胡晓明. 生命科学仪器. 2015(06)
[2]替米沙坦改善小胶质细胞炎症与其促进激活表型转化有关[J]. 刘越,王立宽,孙德佳,王勃,李锦. 国际药学研究杂志. 2014(03)
[3]神经病理性疼痛诊疗专家共识[J]. 神经病理性疼痛诊疗专家组. 中国疼痛医学杂志. 2013(12)
[4]Role of inflammatory cytokines in peripheral nerve injury[J]. Federica Fregnan,Luisa Muratori,Anabel Rodriguez Simǒes,Maria Giuseppina Giacobini-Robecchi,Stefania Raimondo. Neural Regeneration Research. 2012(29)
[5]小胶质细胞活化与神经病理性疼痛[J]. 杨美蓉,杜冬萍. 中国疼痛医学杂志. 2009(02)
博士论文
[1]ATP调控小胶质细胞极化状态进而参与神经病理性疼痛的研究[D]. 张昕.上海交通大学 2015
本文编号：3568735
【文章来源】：济宁医学院山东省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
大鼠SNI神经病理性疼痛模型建造
图 2：大鼠机械痛域测定印迹 （Western Blotting）检测各时相点测定 MWT 后处死大鼠，快速分离 织匀浆后，采用 BCA 法进行蛋白定量, 测定经聚丙烯酰胺凝胶电泳，转至聚偏二氟乙烯清白蛋白室温封闭 2h，加入一抗（Arg-1: 1:50Abcam、CD206: 1:500，Abcam、IBA-1: 1:80Abcam、TNF-a: 1:300，Abcam、IL-4: 1:300bcam），4℃孵育过夜，1×TBST 洗涤三次，每酶标二抗（1：1000）室温孵育 1 h, TBST
图 3：大鼠多聚甲醛灌注取材 (immunofluorescence, IF) 染色ham 组和 SNI14d 组大鼠脊髓冰冻切片中随机染色。冰冻切片置于室温干燥, PBS (0.01M, 10 min，冷却至室温,依次加入含有 0.3％T清室温封闭 1h；加入一抗（CD86, 1:500,AbcIba-1, 1:100,Abcam）,4℃孵育过夜；PBS 洗(Alexa Fluor 488，1：1000，Abcam )室温孵，每次 10 min；含有 DAPI 的抗荧光衰减剂(Zeiss,德国)观察。每张脊髓切片任选5个不重
【参考文献】：
期刊论文
[1]传统观念的转变:极化的小胶质细胞/巨噬细胞在中枢神经系统修复中的双重作用[J]. 杨俭,冉媛媛,张妍,杜会山,刘宗建,吉训明,胡晓明. 生命科学仪器. 2015(06)
[2]替米沙坦改善小胶质细胞炎症与其促进激活表型转化有关[J]. 刘越,王立宽,孙德佳,王勃,李锦. 国际药学研究杂志. 2014(03)
[3]神经病理性疼痛诊疗专家共识[J]. 神经病理性疼痛诊疗专家组. 中国疼痛医学杂志. 2013(12)
[4]Role of inflammatory cytokines in peripheral nerve injury[J]. Federica Fregnan,Luisa Muratori,Anabel Rodriguez Simǒes,Maria Giuseppina Giacobini-Robecchi,Stefania Raimondo. Neural Regeneration Research. 2012(29)
[5]小胶质细胞活化与神经病理性疼痛[J]. 杨美蓉,杜冬萍. 中国疼痛医学杂志. 2009(02)
博士论文
[1]ATP调控小胶质细胞极化状态进而参与神经病理性疼痛的研究[D]. 张昕.上海交通大学 2015
本文编号：3568735
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/3568735.html
最近更新
教材专著
