DGCR8/ZFAT-AS1通过PRC2促进CDX2转录调控胶质瘤细胞生物学行为的机制研究
发布时间：2022-01-11 14:46
目的:脑胶质瘤是人中枢神经系统中最常见的原发性颅内恶性肿瘤。尽管近年来手术切除、化疗和放疗在胶质瘤治疗方面取得了显著进展,但胶质瘤患者的预后仍然很差,在所有癌症中,5年生存率最低,病理级别高的胶质瘤患者中位生存期大约为15个月。因此探索新的有效的分子靶向治疗标志具有重要意义。本研究旨在为揭示RNA结合蛋白DGCR8和长链非编码RNA ZFAT-AS1是否在调控胶质瘤细胞生物学行为中发挥重要作用,并深入研究可能的分子调控机制,即DGCR8促进ZFAT-AS1降解以减弱其以PRC2依赖的方式对CDX2的转录抑制,上调CDX2的表达,促进胶质瘤细胞的生物学行为。研究方法:首先培养人胶质瘤细胞U87、U251和人星型胶质细胞HA。通过quantitative Real-time PCR方法和Western blot方法检测在瘤周脑实质、胶质瘤组织、人星型胶质细胞、胶质瘤细胞中,DGCR8、ZFAT-AS1、CDX2和RRM2B的表达水平。为进一步检测其对胶质瘤细胞生物学行为的作用,通过细胞稳定转染方法分别构建DGCR8沉默的细胞系,以及ZFAT-AS1、CDX2和RRM2B过表达和表达沉默的细...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ZFAT-AS1的表达水平及对胶质瘤细胞生物学行为的影响
中国医科大学硕士学位论文17图3.3DGCR8通过与ZFAT-AS1结合降低其稳定性，发挥促癌作用（A-B）RNA免疫沉淀（RIP）实验证实DCGR8与ZFAT-AS1结合。采用实时荧光定量PCR（quantitativereal-timePCR）法测定相对富集。（A）相对于正常IgG免疫沉淀组，anti-SNRNP70组中U1小核RNA(snRNA)的相对富集量。（B）与正常IgG免疫沉淀组相比，ZFAT-AS1在anti-DGCR8组中的相对富集量。正常小鼠IgG组为阴性对照，anti-SNRNP70组为阳性对照，GAPDH为阴性RNA对照。数据以均值±标准差表示（各组n=3）。与anti-normalIgG组比较，**P<0.01；与GAPDH组比较，##P<0.01。采用t检验进行统计分析。（C）采用Click-iT新生RNA捕获试剂盒（ThermoFisherScientific,USA）对新合成的RNA进行标记和捕获，quantitativereal-time
中国医科大学硕士学位论文19图3.4沉默CDX2抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为（A）在胶质瘤邻近的正常脑实质（Adjacent）和不同分级胶质瘤组织中的CDX2表达水平。对Westernblot检测条带的灰密度值（IDVs）进行统计分析。数据以均数±标准差表示（各组n=12），与Adjacent组比较，**P<0.01；与I-II级胶质瘤组比较，##P<0.01。（B）CDX2在HA、U87和U251细胞中的表达水平。数据以均数±标准差表示（各组n=3）。与HA组相比，*P<0.05，**P<0.01。（C）CDX2对U87和U251细胞增殖的影响。（D）CDX2过表达或下调后检测U87和U251细胞的凋亡百分比。（E）CDX2对U87和U251细胞迁移和侵袭的影响。标尺代表50μm。数据以均数±标准差表示（各组n=3）。与CDX2(+)NC组比较，*P<0.05，**P<0.01；与CDX2(-)NC组比较，##P<0.05；##P<0.01。统计分析采用单因素方差分析。3.5ZFAT-AS1通过招募并结合PRC2在CDX2启动子区诱导H3K27me3修饰，抑制CDX2的转录PRC2通过催化H3K27me2/3修饰抑制基因转录活性。研究表明，lncRNAs正
本文编号：3582965
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ZFAT-AS1的表达水平及对胶质瘤细胞生物学行为的影响
中国医科大学硕士学位论文17图3.3DGCR8通过与ZFAT-AS1结合降低其稳定性，发挥促癌作用（A-B）RNA免疫沉淀（RIP）实验证实DCGR8与ZFAT-AS1结合。采用实时荧光定量PCR（quantitativereal-timePCR）法测定相对富集。（A）相对于正常IgG免疫沉淀组，anti-SNRNP70组中U1小核RNA(snRNA)的相对富集量。（B）与正常IgG免疫沉淀组相比，ZFAT-AS1在anti-DGCR8组中的相对富集量。正常小鼠IgG组为阴性对照，anti-SNRNP70组为阳性对照，GAPDH为阴性RNA对照。数据以均值±标准差表示（各组n=3）。与anti-normalIgG组比较，**P<0.01；与GAPDH组比较，##P<0.01。采用t检验进行统计分析。（C）采用Click-iT新生RNA捕获试剂盒（ThermoFisherScientific,USA）对新合成的RNA进行标记和捕获，quantitativereal-time
中国医科大学硕士学位论文19图3.4沉默CDX2抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为（A）在胶质瘤邻近的正常脑实质（Adjacent）和不同分级胶质瘤组织中的CDX2表达水平。对Westernblot检测条带的灰密度值（IDVs）进行统计分析。数据以均数±标准差表示（各组n=12），与Adjacent组比较，**P<0.01；与I-II级胶质瘤组比较，##P<0.01。（B）CDX2在HA、U87和U251细胞中的表达水平。数据以均数±标准差表示（各组n=3）。与HA组相比，*P<0.05，**P<0.01。（C）CDX2对U87和U251细胞增殖的影响。（D）CDX2过表达或下调后检测U87和U251细胞的凋亡百分比。（E）CDX2对U87和U251细胞迁移和侵袭的影响。标尺代表50μm。数据以均数±标准差表示（各组n=3）。与CDX2(+)NC组比较，*P<0.05，**P<0.01；与CDX2(-)NC组比较，##P<0.05；##P<0.01。统计分析采用单因素方差分析。3.5ZFAT-AS1通过招募并结合PRC2在CDX2启动子区诱导H3K27me3修饰，抑制CDX2的转录PRC2通过催化H3K27me2/3修饰抑制基因转录活性。研究表明，lncRNAs正
本文编号：3582965
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