Bcl-2过表达对海人酸诱导的小鼠颞叶癫痫所致海马损伤的影响

发布时间：2022-01-26 16:44

　　背景:癫痫是一类发病率高、机制复杂的神经系统疾病,多数难以根治,严重影响患者的身心健康和社会功能。颞叶癫痫是一种很常见的癫痫类型,颞叶癫痫发作引起的海马神经元损伤和死亡被认为是癫痫发生发展中的重要环节。现有的动物实验和人体实验都表明,颞叶癫痫发作会激活一系列促凋亡信号通路,最终引起海马区神经元凋亡;而与此同时,细胞内的抗凋亡通路也会反馈性激活,在一定程度上起到保护作用。B细胞淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）是一种抗凋亡蛋白,目前已发现该蛋白在颞叶癫痫发作时表达上升,然而鲜有确切证据表明人工上调bcl-2基因表达能减轻颞叶癫痫引起的海马损伤。目的:本研究旨在探讨人工bcl-2过表达是否会对减轻颞叶癫痫引起的海马神经元损伤。内容:通过构建bcl-2基因过表达慢病毒载体,在小鼠海人酸颞叶癫痫模型中研究Bcl-2蛋白过表达对海马细胞凋亡的影响,进而探讨Bcl-2通路与颞叶癫痫发生发展的关系。方法:1.构建bcl-2基因过表达慢病毒载体:人工合成小鼠bcl-2基因片段,PCR扩增后连接pLV慢病毒载体,导入DH5α大肠杆菌菌株,进行克隆。2.病毒包装:用三质粒慢病毒系统共转染HEK293T细胞系,进行... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：26 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１?ｐＬＶ－ＥＧＦＰ－Ｎ载体图谱

二、实验结果??１．重组质粒构建??宿主大肠杆菌菌落ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳结果如图２所示。选取７、８、１１、４１、??４２、４３号阳性克隆进行测序，结果反馈：１１、４１、４３号测序成功，人工检验测序??结果与原目的基因一致。重组质粒构建成功。三个克隆的具体测序结果如下（５’－３’），??中括号内加粗部分为目的基因片段：??１１?号：ＣＡＧＧＧＧＡＧＣＴＴＡＧＣＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＣＣＧＴＣＡ??ＧＡＴＣＧＣＣＴＧＧＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＡＣＣＴＣＣＡＴ??ＡＧＡＡＧＡＣＡＣＣＧＡＣＴＣＴＡＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＧＣＴＡＧＣＧＣＴＡＣＣＧ??ＧＡＣＴＣ?ＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧ?［ＡＴＧＧＣＧＣ?ＡＡＧＣＣＧＧＧＡＧＡＡＣＡＧＧ??ＧＴＡＴＧ?ＡＴＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧ?ＡＴＧＡＡＧＴＡＣＡＴＡＣＡＴＴＡ??ＴＡＡＧＣＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＧＴＧＧＧＡＴＧ

２．慢病毒包装??重组慢病毒胎鼠神经元转染实验显示荧光显微镜下神经元内出现绿色荧光。证??明病毒构建成功（图３）。??图３重组６ｃ／－２过表达病毒感染胎鼠神经元免疫荧光图像。绿色区域可见ＥＧＦＰ??表达。左下方框标尺边长：０．１?ｍｍ。??１６??

【参考文献】：
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本文编号：3610830