K ATP 通道SUR1亚单位在帕金森病黑质多巴胺能神经元损伤中的作用研究
发布时间：2022-02-10 15:09
帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是继阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）之后的第二大神经退行性疾病,是一种常见且复杂的神经系统退行性疾病,其主要特征是肌僵直、静止性震颤、运动迟缓和姿势反射障碍等运动症状。此外,PD患者在早期还表现出认知功能障碍、精神异常和自主神经功能障碍等一系列非运动症状。PD的主要病理特征是黑质（substantia nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神经元选择性缺失,导致纹状体（striatum,Str）神经元末梢释放DA减少,而残存DA能神经元内出现α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）异常聚集,形成路易小体（Lewy bodies,LBs）。PD的发病机制尚不明确,遗传、环境、衰老、炎症、氧化应激、线粒体功能障碍和铁代谢异常等都可能参与到PD的发生发展中。最近的研究表明,SN区DA能神经元上ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channels,KATP通道)的选择性激活可能参与了PD中SN区DA能神经元的损伤。KATP...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三管玻璃微电极Fig1Schemeof3barrelglassmicroelectrode
青岛大学硕士学位论文61.5.3颅骨开窗用金属耳杆将麻醉完全的小鼠俯卧位固定于脑立体定位仪，左右刻度保持一致，使其居中。用外科剪剪掉头部毛发，用碘伏消毒处理三次，于头部正中切开，用无菌生理盐水暴露视野，少量双氧水腐蚀颅骨骨膜，充分暴露前后囟位置。用电极前后左右测量，调整小鼠的鼻夹位置，从而使小鼠前后囟处在同一水平面。参考小鼠脑定位图谱确定小鼠SN区位置：前囟后3.0-3.3mm，中线旁开1.25-1.5mm，颅骨表面下3.25-4.5mm。在颅骨表面SN区对应区域用0.4mm的牙科钻开窗，去掉外层颅骨，细针轻微剥除脑膜暴露大脑皮层，用生理盐水止血后，用2%琼脂覆盖于暴露出的大脑皮层与颅骨表面齐平。图2电生理记录的实验装置图Fig2Schematicdiagramofexperimentaldevicesusedforextracellularrecordings1.5.4细胞外记录神经元自发放电活动缓慢转动脑立体定位仪竖直杆，使玻璃微电极缓慢下降；当降至琼脂表面时，监视器会显示基线变细，之后改用液压推进器控制电极的下降，缓慢地将电极尖端送至SN区。根据SN区定位及DA能神经元自发放电活动特点，鉴别SN区DA能神经元。观察DA能神经元细胞放电稳定5min，运用生物细胞纳升精密仪器注射器，将药物注射到DA能神经元表面。经生物信号放大器放大信号，数模转换器将信号转换为数字信号后输入计算机，运用Spike2软件记录DA能神经元放电，实验装置图如图2所示。细胞放电信号记录的信噪比大于3：1可用于分析。频率分析主要是选取加药之前120sec的平均放电频率（X1）作为基础放电频率，并计算出其标准差（SD），加药后反应频率采用加药后反应高峰50sec的平均频率（X2）。此外，我们认为X2>X1±2SD或X2<X1±2SD认为细胞对药物有反应，而X1-2SD<X2<X1+2SD认为细胞对药物无反应。
材料与方法71.5.5组织学检查每次在体细胞外电生理记录结束后，注射2%滂胺天蓝于所记录部位（SN区）从而标记微电极尖端位置。实验结束后，将处于麻醉状态的老鼠充分暴露心脏位置，经小鼠左心室进针，先灌注生理盐水至肝脏变白，后改为冰冷4%PFA灌注。之后迅速断头取脑，用4%PFA过夜固定，用冰冻切片机切片（50μm），并于显微镜下观察玻璃微电极尖端末端是否位于SN区（图3A），剔除位置不正确的数据。图3黑质单侧微量注射定位冠状切片图Fig3Confirmationofmicroinjectionsitesinthesubstantianigra2.脑内立体慢病毒注射2.1实验动物准备实验动物购买于青岛药品检验所，选取8-10周C57BL/6小鼠（体重20±2g）以及4月龄A53Tα-syn转基因小鼠，饲养环境为室温23±1℃，12：12hr循环昼夜光照条件生活，自由进食与饮水。在实验前让小鼠适应环境一周，用于后续实验。2.2实验仪器仪器名称生产公司冰冻切片机Leica公司，德国动物脑立体定位仪瑞沃德公司，中国微量注射器飞鸽医疗器械公司，中国荧光显微镜CarlZeiss公司，德国2.3实验试剂（1）0.01mol/LPBS（pH7.4）配制试剂名称生产公司质量Na2HPO4·12H2O江苏强盛公司，中国4gNaH2PO4·2H2O江苏强盛公司，中国0.4gNaClSigma公司，美国9g
【参考文献】：
期刊论文
[1]ATP敏感性钾通道与帕金森病关系的研究进展[J]. 杜希恂,秦康,焦倩,谢俊霞,姜宏. 生理学报. 2016(05)
[2]ATP敏感性钾通道在帕金森病中的作用（英文）[J]. 曾洁,王刚,陈生弟. Neuroscience Bulletin. 2007(06)
本文编号：3619064
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
三管玻璃微电极Fig1Schemeof3barrelglassmicroelectrode
青岛大学硕士学位论文61.5.3颅骨开窗用金属耳杆将麻醉完全的小鼠俯卧位固定于脑立体定位仪，左右刻度保持一致，使其居中。用外科剪剪掉头部毛发，用碘伏消毒处理三次，于头部正中切开，用无菌生理盐水暴露视野，少量双氧水腐蚀颅骨骨膜，充分暴露前后囟位置。用电极前后左右测量，调整小鼠的鼻夹位置，从而使小鼠前后囟处在同一水平面。参考小鼠脑定位图谱确定小鼠SN区位置：前囟后3.0-3.3mm，中线旁开1.25-1.5mm，颅骨表面下3.25-4.5mm。在颅骨表面SN区对应区域用0.4mm的牙科钻开窗，去掉外层颅骨，细针轻微剥除脑膜暴露大脑皮层，用生理盐水止血后，用2%琼脂覆盖于暴露出的大脑皮层与颅骨表面齐平。图2电生理记录的实验装置图Fig2Schematicdiagramofexperimentaldevicesusedforextracellularrecordings1.5.4细胞外记录神经元自发放电活动缓慢转动脑立体定位仪竖直杆，使玻璃微电极缓慢下降；当降至琼脂表面时，监视器会显示基线变细，之后改用液压推进器控制电极的下降，缓慢地将电极尖端送至SN区。根据SN区定位及DA能神经元自发放电活动特点，鉴别SN区DA能神经元。观察DA能神经元细胞放电稳定5min，运用生物细胞纳升精密仪器注射器，将药物注射到DA能神经元表面。经生物信号放大器放大信号，数模转换器将信号转换为数字信号后输入计算机，运用Spike2软件记录DA能神经元放电，实验装置图如图2所示。细胞放电信号记录的信噪比大于3：1可用于分析。频率分析主要是选取加药之前120sec的平均放电频率（X1）作为基础放电频率，并计算出其标准差（SD），加药后反应频率采用加药后反应高峰50sec的平均频率（X2）。此外，我们认为X2>X1±2SD或X2<X1±2SD认为细胞对药物有反应，而X1-2SD<X2<X1+2SD认为细胞对药物无反应。
材料与方法71.5.5组织学检查每次在体细胞外电生理记录结束后，注射2%滂胺天蓝于所记录部位（SN区）从而标记微电极尖端位置。实验结束后，将处于麻醉状态的老鼠充分暴露心脏位置，经小鼠左心室进针，先灌注生理盐水至肝脏变白，后改为冰冷4%PFA灌注。之后迅速断头取脑，用4%PFA过夜固定，用冰冻切片机切片（50μm），并于显微镜下观察玻璃微电极尖端末端是否位于SN区（图3A），剔除位置不正确的数据。图3黑质单侧微量注射定位冠状切片图Fig3Confirmationofmicroinjectionsitesinthesubstantianigra2.脑内立体慢病毒注射2.1实验动物准备实验动物购买于青岛药品检验所，选取8-10周C57BL/6小鼠（体重20±2g）以及4月龄A53Tα-syn转基因小鼠，饲养环境为室温23±1℃，12：12hr循环昼夜光照条件生活，自由进食与饮水。在实验前让小鼠适应环境一周，用于后续实验。2.2实验仪器仪器名称生产公司冰冻切片机Leica公司，德国动物脑立体定位仪瑞沃德公司，中国微量注射器飞鸽医疗器械公司，中国荧光显微镜CarlZeiss公司，德国2.3实验试剂（1）0.01mol/LPBS（pH7.4）配制试剂名称生产公司质量Na2HPO4·12H2O江苏强盛公司，中国4gNaH2PO4·2H2O江苏强盛公司，中国0.4gNaClSigma公司，美国9g
【参考文献】：
期刊论文
[1]ATP敏感性钾通道与帕金森病关系的研究进展[J]. 杜希恂,秦康,焦倩,谢俊霞,姜宏. 生理学报. 2016(05)
[2]ATP敏感性钾通道在帕金森病中的作用（英文）[J]. 曾洁,王刚,陈生弟. Neuroscience Bulletin. 2007(06)
本文编号：3619064
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