LiCl对IDH2突变的神经胶质瘤细胞增殖及迁移影响的研究

发布时间：2022-02-17 08:40

　　神经胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤,具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低的“三高一低”的特点,依照WHO组织病理学和临床标准,人类大脑神经胶质瘤分为I-IV级,WHO IV级被认为是神经胶质母细胞瘤,在成年人群中,是主要盛行和恶性的原始大脑肿瘤。异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase, IDH）是一类酶家族,在人基因组中,有5类IDH基因可编码3类异柠檬酸脱氢酶：IDH1,IDH2和IDH3,均可催化异柠檬酸（ICT）生成还原性辅酶（NADPH）和α-酮戊二酸（α-KG）。研究发现,IDH1（R132）突变在继发性胶质母细胞瘤和低级别神经胶质瘤中发生率较高,IDH2（R172）突变则较低,IDH1和IDH2突变都是单一位点的氨基酸突变。IDH1突变后其催化活性降低,相对应的酶促反应产物NADPH和α-KG的产量下降,但同时又使其获得了一种新的酶促活性,催化NADPH和a-KG生成2-HG。IDH突变后,细胞内HIF-1α稳定性提高,进而调节其下游靶基因的表达,促进肿瘤细胞的生长。当前,肿瘤细胞内微环境是癌症研究领域的核心问题,对肿瘤生长、迁移的生物学机制的正确理... 

【文章来源】：山西大学山西省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)突变对胶质瘤细胞中HIF-1α的影响
        1.1.1 神经胶质瘤
        1.1.2 IDH突变的特点以及对HIF-1α的影响
    1.2 HIF-1α对下游靶基因MMPs,VEGF和Cyclin D1表达的影响
    1.3 LiCl对肿瘤细胞中Wnt/β-catenin及其他通路的调控作用
    1.4 研究LiCl与IDH突变之间的关系和意义
    1.5 论文设计思路
        1.5.1 研究背景
        1.5.2 实验目的和主要研究内容
        1.5.3 实验方案及流程
        1.5.4 研究的创新点
第二章 C6细胞中IDH2突变对其迁移和增殖的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞和质粒
        2.1.2 酶和生化试剂
        2.1.3 试剂的配制
        2.1.4 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 三种质粒转染C6细胞
        2.2.3 三种质粒转染C6细胞后细胞内HIF-1α、Cyclin D1、M2-PK以及培养基内VEGF的表达水平分析
        2.2.4 免疫荧光检测实验
        2.2.5 明胶酶谱实验
        2.2.6 体外划痕擦伤实验
    2.3 实验结果
        2.3.1 三种质粒转染C6细胞后细胞内HIF-1α、Cyclin D1、M2-PK以及培养基内VEGF的水平变化
        2.3.2 C6细胞内HIF-1α和VEGF的免疫荧光检测结果
        2.3.3 明胶酶谱检测C6细胞内MMP-2,9的分泌水平
        2.3.4 体外划痕擦伤检测C6细胞的迁移能力
    2.4 讨论
第三章 GSK-3β的磷酸化对IDH2突变的C6细胞增殖活性的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 细胞和质粒
        3.1.2 酶和生化试剂
        3.1.3 试剂的配制
        3.1.4 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 三种质粒转染C6细胞
        3.2.3 LiCl处理细胞
        3.2.4 LY294002处理细胞
        3.2.5 LiCl和LY294002作用分别转染三种质粒的C6细胞后细胞内GSK-3β的磷酸化水平分析
        3.2.6 LY294002作用分别转染三种质粒的C6细胞后对细胞增殖活力的影响
        3.2.7 LY294002和LiCl先后作用分别转染三种质粒的C6细胞后对细胞增殖活力的影响
    3.3 实验结果
        3.3.1 LiCl作用分别转染三种质粒的C6细胞后细胞内GSK-3β的磷酸化水平变化
        3.3.2 LY294002作用分别转染三种质粒的C6细胞后细胞内GSK-3β的磷酸化水平变化
        3.3.3 LY294002和LiCl先后作用分别转染三种质粒的C6细胞后细胞内GSK-3β的磷酸化水平变化
        3.3.4 LY294002作用分别转染三种质粒的C6细胞后对细胞增殖活力的影响
        3.3.5 LY294002和LiCl先后作用分别转染三种质粒的C6细胞后对细胞增殖活力的影响
    3.4 讨论
第四章 LiCl对IDH2突变的C6细胞迁移和增殖的影响
    4.1 实验材料
        4.1.1 细胞和质粒
        4.1.2 酶和生化试剂
        4.1.3 试剂的配制
        4.1.4 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 三种质粒转染C6细胞
        4.2.3 LiCl处理细胞
        4.2.4 LiCl作用分别转染三种质粒的C6细胞后对细胞增殖活力的影响
        4.2.5 明胶酶谱实验
        4.2.6 体外划痕擦伤实验
        4.2.7 LiCl作用分别转染三种质粒的C6细胞后细胞内HIF-1α的表达水平分析和β-catenin的核积累量的分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 LiCl作用分别转染三种质粒的C6细胞后对细胞增殖活力的影响
        4.3.2 明胶酶谱检测C6细胞内MMP-2,9的分泌水平
        4.3.3 体外划痕擦伤检测LiCl对C6细胞迁移能力的影响
        4.3.4 LiCl作用分别转染三种质粒的C6细胞后细胞内HIF-1α的表达水平和β-catenin在细胞核积累量的影响
    4.4 讨论
参考文献
总结与展望
附录
致谢
个人简况及联系方式


【参考文献】：
期刊论文
[1]GSK-3β:结直肠癌发生发展中的重要调控分子[J]. 李挥力,王继亮,王国斌,陶凯雄.  世界华人消化杂志. 2010(28)
[2]口腔鳞癌中HIF-1α和MMP-2的表达及其相关性[J]. 陈卫民,王岩.  河南大学学报(医学版). 2008(04)
[3]HIF-1α和MMP-2在乳腺浸润性导管癌中的表达及其相关性[J]. 蔡凤林,周士福,马兆生,吴玉玉,高玮红.  四川医学. 2007(08)



本文编号：3629120