血管性血友病因子与脑梗塞形成的相关性分析研究

发布时间：2017-05-14 11:24

  本文关键词：血管性血友病因子与脑梗塞形成的相关性分析研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景:脑血管疾病(cerebrovascular disease,CVD)是世界范围内成人致残的首要因素和第三位人口死亡的病因,也是老年人认知功能障碍和情感障碍的重要原因之一。由中国疾病预防控制中心2012年发布的国家卫生统计数据指出,我国为CVD的高发国家,CVD的发病率由2003年的6.6‰上升到2008年的9.7‰,2011年CVD的城镇人口死亡率为138.68/10万,是我国人口死亡的第二位原因。脑卒中(stroke)是指急性起病、迅速出现局限性或弥漫性脑功能缺失征象的脑血管性临床事件。脑梗塞(cerebral infarction,CI)又称缺血性脑卒中(cerebral ischemic stroke,CIS)是由于脑部血液供应障碍,缺血、缺氧引起的局限性脑组织的缺血性坏死或脑软化,约占全部脑卒中的80%。血管内皮损伤,导致血小板和炎性细胞在内皮损伤部粘附、聚集,最终形成血栓是脑梗塞发生的主要原因。血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)是一种大分子量的具有粘附功能的多聚体糖蛋白,其在止血与血栓过程中发挥着重要的作用。当血管壁受损时,VWF作为血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP)Ib与受损内皮细胞上的胶原之间的桥梁,可以介导血小板粘附到血管壁上。近年来,越来越多的研究证明高水平的VWF和低水平的血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)与缺血性脑卒中的发生发展有关,而且VWF介导的新型血小板粘附和激活的拮抗剂,作为一种更强大、安全的抵抗血栓形成紊乱的药物,也受到越来越多的关注。我室曾研制了一套操作简单、特异性强、敏感性高的ELISA试剂盒用于检测血浆中的VWF抗原含量(VWF:Ag)、VWF瑞斯托霉素辅因子活性(VWF:Rcof)及VWF胶原结合能力(VWF:CB)。本研究使用这些ELISA试剂盒检测脑梗塞患者血浆中的上述指标,并结合ADAMTS13活性(ADAMTS13)检测、VWF多聚体电泳分析,为中国人群中的脑梗塞患者的分子病理机制研究提供更可靠的依据。目的:本研究旨在通过制备重组血小板糖膜蛋白Ibα-Fc融合蛋白(包含Ig G Fc段,rf GPIbα-Fc),并检测脑梗塞患者和正常对照组血浆中的VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB和ADAMTS13,分析这些指标之间的比值VWF:Rcof/VWF:Ag,VWF:CB/VWF:Ag,ADAMTS13/VWF:Ag,ADAMTS13/VWF:Rcof,ADAMTS13/VWF:C B,并结合VWF多聚体电泳分析,进一步了解VWF及ADAMTS13在脑梗塞的发生发展中的作用。方法:(1)用CHO细胞培养表达rf GPIbα-Fc蛋白,用亲和层析柱纯化rf GPIbα-Fc,并用ELISA、10%SDS-PAGE电泳、Werstern blot方法检测其纯度和免疫学活性。(2)收集苏州大学附属第一医院神经内科住院的94例脑梗塞患者血浆作为病例组和103例正常志愿者的血浆作为对照组。(3)采用ELISA方法检测VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB水平,用荧光标记VWF73底物荧光共振能量转移试验(FRETS-VWF73)检测ADAMTS13活性。(4)应用SPSS 20.0和Med Calc 13.2.2.0.统计软件分析上述指标及它们之间的比值与脑梗塞的关系。(5)利用VWF多聚体电泳分析病例组及对照组血浆中的VWF多聚体形态。结果:(1)成功制备富含rf GPIbα-Fc的细胞上清并获得高活性的rf GPIbα-Fc纯化产物。(2)脑梗塞病例组的血浆VWF:Ag(M[IQR],176%[114%-293%])、VWF:Rcof(197%[105%-381%])水平高于对照组(105%[61%-145%];100%[60%-175%],P0.001);病例组ADAMTS13(109%[80%-132%])、VWF:CB/VWF:Ag(0.43[0.28-0.90])、ADAMTS13/VWF:Ag(0.54[0.32-0.99])和ADAMTS13/VWF:Rcof(0.57[0.29-0.91])水平明显低于对照组(117%[103%-146%];1.13[0.72-1.81];1.23[0.79-2.16];1.18[0.71-1.79],P0.01)。高水平的VWF:Ag(OR=5.11,95%CI,1.49-17.50),VWF:Rcof(OR=5.04,95%CI,1.62-15.66)和低水平的VWF:CB/VWF:Ag(OR=5.91,95%CI,1.95-17.93),ADAMTS13/VWF:Ag(O R=9.11,95%CI,2.49-33.33),ADAMTS13/VWF:Rcof(OR=3.73,95%CI,1.39-10.03)与脑梗塞的发生有关。(3)VWF多聚体电泳分析病例组与对照组的VWF多聚体形态无明显差别。结论:(1)获得了具有较高纯度和活性的rf GPIbα-Fc蛋白。(2)血浆中高水平的VWF:Ag、VWF:Rcof及低水平的VWF:CB/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Rcof与脑梗塞的发生有关;(3)脑梗塞病人血浆中仅为VWF量的异常,而无VWF多聚体形态的异常。(4)联合应用VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Rcof可以更清楚的了解VWF与脑梗塞的关系,并为以后临床应用VWF靶向药物提供参考指标。
【关键词】：糖蛋白Ibα 血管性血友病因子 ADAMTS13 脑梗塞
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-14
• 第一部分 重组血小板膜糖蛋白Ibα 的表达和纯化14-21
• 材料和方法14-17
• 结果17-19
• 讨论19-21
• 第二部分 VWF相关指标在脑梗塞中的检测及统计分析21-39
• 材料与方法21-26
• 结果26-36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 综述44-51
• 参考文献48-51
• 攻读学位期间发表的论文及基金资助情况51-52
• 中英文对照缩略词表52-54
• 致谢54-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 邱丽君,汪维乐,周琪,沈霞;脑血管病与高凝状态的关系[J];上海第二医科大学学报;2004年06期

2 吴占福;黄瑞英;;脑血管疾病的危险因素及预防[J];中国老年学杂志;2009年22期

3 胡萍;谢如锋;王志成;;血小板黏附受体GPIb-IX-V介导的信号通路研究进展[J];安徽医科大学学报;2014年03期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 谷颖;血管性血友病因子瑞斯托霉素辅因子活性测定的酶联免疫分析试剂盒的研制及临床应用[D];苏州大学;2011年

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本文编号：365073