HCMV感染致人神经胶质瘤U251细胞株miRNA表达改变的初步研究

发布时间：2022-07-15 16:46

　　目的：筛选人巨细胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）感染人神经胶质瘤细胞差异表达的miRNA,为进一步研究HCMV的致畸机制提供基础。方法：用HCMV （MOI=5）感染人神经胶质瘤U251细胞株,感染后24h,48h,72h收获细胞作为为实验组,以模拟感染的正常细胞为对照组。用miRNA表达谱芯片技术检测细胞的miRNA表达水平,应用软件筛选并获得一些差异表达明显的miRNA,再利用Taqman探针或SYBR绿色荧光染料I （SYBR GREEN I）实时定量PCR验证芯片结果,应用生物信息学软件预测miRNA的靶基因,并筛选出与神经系统发育有关的靶基因。结果：与模拟感染的细胞相比,24h.p.i,48h.p.i,72h.p.i实验组中有33个细胞miRNA表达显著差异,其中19个表达上调均超过2倍,有hsa-miR-1275, hsa-miR-296-3p, hsa-miR-1246, hsa-miR-409-3p等；14个表达下调超过2倍,有hsa-miR-634, hsa-miR-129-3p, hsa-miR-340*, hsa-miR-769-5... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
目录
縮略语
前言
第一章 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 细胞株
        1.1.2 病毒株
        1.1.3 主要试剂及其来源
        1.1.4 主要仪器设备
        1.1.5 常用试剂的配制
    1.3 实验方法
        1.3.1 HCMV AD169株增殖与毒力测定
        1.3.2 HCMV AD169株感染U251细胞株
        1.3.3 细胞总RNA的提取
        1.3.4 miRNA表达谱芯片杂交及数据分析
        1.3.5 实时定量PCR
        1.3.6 部分差异表达的miRNA的靶基因生物信息学分析
第二章 结果
    2.1 HCMV AD169株增殖与毒力测定
        2.1.1 HCMV AD169株感染HEL细胞致细胞病变效应
        2.1.2 HCMV TCID_(50)滴定
        2.1.3 HCMV蚀斑实验
    2.2 总RNA质量检测
    2.3 miRNA表达谱芯片杂交结果
    2.4 部分差异miRNA实时定量PCR验证结果
        2.4.1 探针法实时定量PCR验证结果
        2.4.2 染料法实时定量PCR验证结果
    2.5 部分差异miRNA靶基因生物信息学分析
第三章 讨论
    3.1 研究HCMV致畸机制的意义
    3.2 miRNA的特点及与病毒的关系
    3.3 miRNA表达谱芯片的分析
    3.4 miRNA实时定量PCR的分析
    3.5 miRNA靶基因的生物信息学分析
第四章 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读学位期间主要的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]人巨细胞病毒感染对人神经干细胞定向星形胶质细胞分化过程中Notch相关信号分子表达的影响[J]. 李玲,白志强,李鹏,刘志军,王海涛,刘海燕,姜光域,宋旭霞,钱冬萌,闫志勇,丁守怡,王斌.  医学研究生学报. 2010(10)
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本文编号：3662447