胶质瘤uPA基因启动子甲基化及其表达的临床意义

发布时间：2017-05-15 03:01

  本文关键词：胶质瘤uPA基因启动子甲基化及其表达的临床意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过甲基化特异性多聚酶链反应法(Methylation special-PCR,MSP)和免疫组织化学染色半定量法((Immunohistochemistry, IHC))测定胶质瘤中尿激酶型纤维酶原激活剂(Urokinase type plasminogen activator, uPA)基因启动子区甲基化状态和蛋白表达情况。运用统计学方法分析uPA启动子甲基化状态及其蛋白表达分别与性别、年龄情况和肿瘤病理学分级的关系,并分析uPA启动子甲基化与uPA蛋白表达二者之间的相关性。探讨uPA基因启动子甲基化在胶质瘤发生发展中所产生的的作用以及uPA蛋白表达与胶质瘤病理级别的的关系。探究DNA甲基化在恶性肿瘤细胞中的表观遗传学作用机制并为个体化治疗提供指导。方法取自2013年1月-2014年8月间兰州大学第二医院神经外科经手术切除后的胶质瘤组织标本54例。采用WHO(2007年)分类和分级标准,运用甲基化特异性多聚酶链反应法检测uPA基因启动子区甲基化状态,计算不同级别胶质瘤中发生甲基化、部分甲基化和未甲基化的比率。运用链霉素抗生物-过氧化物酶(SP法)进行免疫组织化学染色,细胞浆中出现为棕红色颗粒为uPA蛋白阳性表达。在光学显微镜下观察阳性细胞染色深浅并对视野内的阳性细胞数计数,计算得出阳性细胞数占细胞总数的百分比,结果计分标准采用免疫反应积分法。通过SPSS13.0软件分析uPA基因启动子甲基化、uPA蛋白表达分别与临床资料和病理资料的相关性。结果54例胶质瘤组织标本中uPA基因启动子在Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤中的甲基化率分别是72.2、38.9和16.7%,病理级别组间的差别具有统计学意义(P0.05)。其甲基化情况在患者性别、年龄和病理类型(组织分型)各组组间均无统计学差异(P0.05)；uPA蛋白在Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤中的阳性表达率分别是72.2、77.8和94.4%,病理级别组间的差别具有统计学意义(P0.05),其表达情况在患者性别、年龄和病理类型(组织分型)各组组间均无统计学差异(P0.05)。该试验表明了uPA基因启动子区的甲基化率是随胶质瘤的病理分级的增高而降低。uPA蛋白的表达水平是随胶质瘤的病理分级的增高而增高。在Ⅳ级胶质瘤中uPA基因启动子区的甲基化和uPA蛋白表达呈负相关(rs=0.233,P=0.029)。结论1.uPA基因启动子区甲基化情况与胶质瘤病理分级呈负相关,特别见于Ⅳ级的胶质母细胞瘤中。该启动子甲基化和胶质瘤的生长和侵袭有关。2.低程度的甲基化可能激活uPA蛋白或促进uPA蛋白的表达。3.uPA蛋白表达水平与胶质瘤病理分级呈正相关,与胶质瘤的恶性增值有关。4.胶质瘤中uPA基因启动子甲基化导致uPA蛋白低表达。在Ⅳ级胶质瘤中uPA基因启动子甲基化状态与uPA蛋白表达二者之间呈负相关。
【关键词】：胶质瘤 尿激酶型纤维酶原激活剂 DNA甲基化
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
【目录】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 前言9-12
• 材料与实验方法12-21
• 2.1 主要仪器与试剂12-13
• 2.1.1 主要仪器12
• 2.1.2 主要试剂12
• 2.1.3 其他常用试剂及设备12-13
• 2.1.4 常用试剂配制13
• 2.1.5 PCR甲基化引物及免疫组化抗体13
• 2.2 实验研究对象及资料13-14
• 2.2.1 研究对象13
• 2.2.2 临床资料13-14
• 2.3 实验方法及步骤14-20
• 2.3.1 技术路线图14
• 2.3.2 甲基化实验步骤14-19
• 2.3.3 甲基化结果判定19
• 2.3.4 免疫组化实验步骤19-20
• 2.3.5 免疫组化结果判定20
• 2.4 统计学处理20-21
• 结果21-28
• 3.1 胶质瘤组织DNA中uPA基因启动子的甲基化21-24
• 3.1.1 uPA基因启动子甲基化与胶质瘤患者性别、年龄的关系21-22
• 3.1.2 uPA基因启动子甲基化与胶质瘤病理学特征的关系22-24
• 3.2 胶质瘤组织DNA中uPA蛋白的表达24-27
• 3.2.1 uPA蛋白的表达与胶质瘤患者性别、年龄的关系24-25
• 3.2.2 uPA蛋白表达与胶质瘤病理学特征的关系25-27
• 3.3 胶质瘤中uPA基因启动子甲基化和uPA蛋白表达的相关性27-28
• 讨论28-33
• 4.1 uPA的甲基化位点28
• 4.2 uPA基因启动子甲基化与胶质瘤28-29
• 4.3 uPA基因启动子部分甲基化、未甲基化和胶质瘤29-30
• 4.4 uPA蛋白表达与胶质瘤30-31
• 4.5 uPA基因启动子甲基化对uPA蛋白表达的影响31-33
• 研究展望33-34
• 结论34-35
• 参考文献35-38
• 综述38-46
• 参考文献43-46
• 附录46-49
• 在科研期间的成果49-50
• 致谢50

【参考文献】

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1 张壮;李宁毅;陈万涛;尚伟;;口腔鳞癌中MMP-1、MMP-2、uPA的表达与肿瘤侵袭和转移的关系[J];实用口腔医学杂志;2006年04期

  本文关键词：胶质瘤uPA基因启动子甲基化及其表达的临床意义，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：366712