miR-21激活背根神经节中TLR8并参与神经病理性疼痛

发布时间：2022-08-12 11:17

　　目的神经病理性疼痛是一种慢性疼痛,它的机制复杂、病程长、严重影响患者的生活质量,但在临床上缺乏有效的镇痛药,因而有待发现新的治疗靶点。哺乳动物Toll样受体8（TLR8）通过识别内源和外源性刺激促进防御性炎症反应,参与机体免疫应答过程。另外,TLR8还可以识别单链和双链RNA。miR-21作为与疼痛密切相关的小RNA,在体外可以通过外泌体的形式作用于免疫细胞中的TLR8。围绕TLR8和miR-21,本文研究了外周神经损伤后TLR8和miR-21在背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）中的表达分布以及它们在神经病理性疼痛中的作用和机制。方法采用单侧L5脊神经结扎（SNL）的方法建立神经病理性疼痛模型;行为学方法检测SNL和鞘内注射miR-21 mimic后不同时间点WT小鼠和Tlr8^-/-小鼠的机械性触诱发痛和热痛觉过敏行为;免疫荧光双标检测TLR8在DRG神经元细胞器的定位;原位杂交实验检测miR-21在DRG神经元表达及与TLR8的共标情况;实时定量PCR检测SNL、鞘内注射TLR8激动剂VTX-2337和miR-21 mimic后多种炎... 

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
第二章 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 神经病理性疼痛模型 (SNL) 的建立
        2.2.2 行为学检测
        2.2.3 脊髓鞘内注射
        2.2.4 L5脊神经注射
        2.2.5 灌注取材
        2.2.6 Real-time PCR
        2.2.7 免疫印迹试验 (Western Blot)
        2.2.8 免疫荧光染色
        2.2.9 基因敲除小鼠鉴定
        2.2.10 原位杂交
        2.2.11 传代细胞系的培养
        2.2.12 荧光素酶报告基因检测
        2.2.13 统计分析
第三章 结果
    3.1 背根神经节中的TLR8在慢性疼痛中的作用
        3.1.1 Tlr8-/-小鼠的鉴定
        3.1.2 敲除Tlr8基因不影响基础疼痛阈值、运动、神经纤维及化学递质的表达
        3.1.3 敲除Tlr8基因降低SNL诱导的神经病理性疼痛行为
    3.2 TLR8在细胞器中的定位及其参与疼痛调节的下游机制研究
        3.2.1 背根神经节中的TLR8表达分布于溶酶体和内涵体中
        3.2.2 鞘内注射TLR8激动剂VTX-2337 激活ERK通路
        3.2.3 敲除TLR8抑制SNL诱发的p ERK增多
        3.2.4 敲除TLR8抑制背根神经节中炎症因子的表达
    3.3 非编码miR-21 参与TLR8调控神经病理性疼痛
        3.3.1 神经损伤后DRG中miR-21 表达增多
        3.3.2 miR-21 表达在DRG的大中小神经元
        3.3.3 miR-21 通过TLR8诱发疼痛行为的产生并且激活ERK通路
        3.3.4 抑制miR-21 缓解SNL诱发的神经病理性疼痛
第四章 讨论
    4.1 DRG神经元内的TLR8在神经病理性疼痛中的作用
    4.2 TLR8参与神经病理性疼痛的下游信号通路
    4.3 miR-21 作为TLR8的内源性配体调节神经病理性疼痛
第五章 结论
参考文献
英文缩写词
综述
    综述参考文献
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目
致谢



本文编号：3675778