MiR-183/96/182簇调控胶质瘤细胞中ROS诱导的细胞凋亡及其对化疗敏感性的影响

发布时间：2022-10-22 20:42

　　[研究背景] 很多miRNA在基因组中以簇的形式存在,序列相似、转录方向一致且协同发挥作用。miR-183、miR-96和miR-182共同构成miR-183/96/182簇。miR-183/96/182簇的成员位于人类染色体7q32.2,相距4413bp内且转录方向相同。这些miRNA转录于基因间区且有独立的启动子。这些miRNA的协同表达可能在人类生命活动的正常生理或病理条件下（包括肿瘤）发挥着重要的作用。人类miR-183/96/182簇在多种肿瘤中高表达,且这种过表达对于膀胱癌、前列腺癌和尿细胞学搜检来说是一种很好的标志物。miR-183/96/182簇的多效性体现在可调节髓母细胞瘤的细胞存活、增殖和迁移。然而,miR-183/96/182簇的协同表达在胶质瘤的发生和发展中的作用机制尚不清楚。 [miR-183/96/182簇调控胶质瘤细胞的增殖与凋亡] 原位杂交及qRT-PCR均证实miR-183、miR-96和miR-182在脑胶质瘤中高表达。在U251、U87细胞中转染miR-183/96/182簇中的单个或全部miRNA mimics48h后进行MTT... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
主要缩略词简表
第一章 前言
技术路线
第二章 材料与方法
    2.1 细胞
    2.2 组织样本
    2.3 菌株
    2.4 质粒载体
    2.5 酶类
    2.6 试剂盒
    2.7 抗体
    2.8 其它生化试剂
    2.9 细胞培养用试剂
    2.10 探针及引物
    2.11 主要仪器
    2.12 原位杂交检测miRNA的表达
    2.13 原位杂交结果分析
    2.14 培养细胞及组织的RNA制备
        2.14.1 培养细胞总RNA的抽提
        2.14.2 组织细胞总RNA的抽提
        2.14.3 RNA中痕量DNA的消化
    2.15 real-time PCR检测
        2.15.1 miRNA检测
        2.15.2 mRNA检测
    2.16 细胞蛋白抽提
        2.16.1 细胞总蛋白的抽提
        2.16.2 线粒体/胞浆蛋白抽提
        2.16.3 BCA测蛋白浓度
    2.17 Western blot检测
    2.18 miRNA和si-RNA转染目的细胞
    2.19 MTT
    2.20 Hoechst检测细胞凋亡
    2.21 流式细胞分析细胞凋亡的变化
    2.22 miRNA的靶基因验证
    2.23 JC-1检测MMP(△Ψm)
    2.24 H_2DCFDA检测胞内ROS生成
    2.25 统计分析
第三章 结果
    1. miR-183/96/182簇在胶质瘤组织中高表达
    2. miR-183/96/182簇促进胶质瘤细胞的增殖并抑制FGF9、CPEB1和FOXO1的表达
    3. miR-183/96/182簇调节细胞凋亡和线粒体跨膜电位(MMP,△Ψm)
    4. miR-183/96/182簇对胶质瘤细胞内ROS生成的影响
    5. miR-183/96/182簇调控AKT/P53/凋亡信号通路
    6. miR-183/96/182簇沉默可以增加胶质瘤细胞对化疗的敏感性
第四章 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间主要研究成果
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-106-363基因簇在脊椎动物中的进化分析[J]. 龚熹,李思光,汪艳璐,罗玉萍.  基因组学与应用生物学. 2012(02)
[2]6种microRNAs在前列腺癌组织中的表达[J]. 尹玉,李明,李昊,江燕,曹立宇,张洪福,徐晓春.  中华男科学杂志. 2010(07)
[3]MicroRNA基因簇的多样性与进化[J]. 张雁峰,张锐,宿兵.  中国科学（C辑:生命科学）. 2009(01)
[4]α-硫辛酸对缺氧应激肝癌细胞线粒体呼吸率和产能代谢的影响[J]. 黄勇超,施冬云,刘珊林,刘志昕,俞培忠,沈新南.  生物物理学报. 2007(06)
[5]染色体上聚集的microRNAs具有更多共同的靶基因[J]. 李永庆,徐建震,孟志刚,李永进.  生物物理学报. 2007(06)



本文编号：3696836